[发明专利]一种糖化血红蛋白的检测方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种糖化血红蛋白的检测方法及其试剂盒。

背景技术

糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，它的英文代号为HbA1c。总血红蛋白可以分为A，A2，F三种组分，其中F主要在胎儿期，而成人主要为A，是由两个α链和两个β链构成。A2由两个α链和两个δ链形成，F由两个α链和两个γ链形成。成人HbA占97％，又可分为HbA₀和HbA1两种，HbA₀为没有被糖基化部分，而HbA1为被糖基化部分。正常人平均HbA1c水平约为5％。总HbA1约占6％左右，而HbA1a和HbA1b总和尚低于1％。血糖和血红蛋白结合生成的糖化血红蛋白是不可逆反应，糖化血红蛋白与血糖浓度成正比，并且保持120天左右。所以，测试糖化血红蛋白可以观测到此前120天的血糖浓度。即患者近8～12周的血糖控制情况。因此，作为糖尿病标志物，在临床检查中进行日常测定作为血糖控制的指标。

目前临床实验室中应用的糖化血红蛋白检测方法主要有两大类：一类方法基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白所带的电荷不同，如离子层析法、电泳等方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析、离子捕获法和免疫法等。其中高效液相离子层析法(HPLC)测定HbA1c使其准确性和重复性得到很大的提高，被公认为金标准。

高效液相层析法(HPLC)是近二十年来发展起来的一项新颖快速的分离技术。它是在经典液相层析法基础上，引进了气相层析的理论具有气相层析的全部优点。由于HPLC分离能力强、测定灵敏度高，可在室温下进行，应用范围极广。但是，高效液相色谱在分析糖化血红蛋白时，为了获得更可靠准确的鉴定结果，往往需要经过较为复杂的前处理过程，从而导致检测周期较长，不能满足临床快速定量检测的要求。而如果前处理不当，则会导致色谱柱寿命缩短、定性定量不准的问题发生。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种糖化血红蛋白的检测方法及其试剂盒。本发明提供的方法色谱柱选择合理，配合适宜的流动相，能够实现对糖化血红蛋白的快速、准确检测，且色谱柱分辨率高、耐受性好。

本发明提供的糖化血红蛋白检测的方法为：将血样以水稀释后，采用GlyHb色谱柱，经高效液相色谱仪或糖化血红蛋白仪检测。

在本发明的实施例中，血样与水的比例为1:200。

高效液相色谱可采用等度、二相或三相梯度洗脱。

在本发明的实施例中，高效液相色谱仪检测采用二相或三相梯度洗脱；流动相A相为pH值为2～10的缓冲液；流动相B相为添加无机盐的A相；流动相C相为去离子水或超纯水。

在本发明的实施例中，流动相B相中添加的无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化锂、硫酸盐、碳酸盐、醋酸盐、高氯酸盐或磷酸盐中任一种或两者以上的混合物。

在本发明的实施例中，流动相B相中添加的无机盐的浓度为0.1mol/L～2mol/L。

在本发明的实施例中，流动相A相、流动相B相或流动相C相中还包括防腐剂。

本发明所述的防腐剂为叠氮化钠或叠氮化钾。

在本发明的实施例中，流动相A相、流动相B相或流动相C相中防腐剂的质量分数不高于1％。

在本发明的实施例中，流动相A相为磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、草酸盐缓冲液、甲酸盐缓冲液、二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、Bis-Tris/磷酸盐溶液、Bis-Tris/柠檬酸溶液、Bis-Tris/柠檬酸/磷酸盐溶液、柠檬酸/磷酸盐溶液或Tris/磷酸盐溶液中任一种或两者以上的混合物。

在一些实施例中，高效液相色谱仪检测的柱温为4℃～60℃。

作为优选，高效液相色谱检测的柱温为30℃～50℃。

优选的，高效液相色谱检测的柱温为40℃。

在一些实施例中，高效液相色谱检测的波长为210nm～450nm。

作为优选，高效液相色谱检测的的波长为415nm。

在一些实施例中，高效液相色谱检测的流速为1mL/min～5mL/min。

作为优选，高效液相色谱检测的流速为1.5mL/min。

在一些实施例中，高效液相色谱检测的进样量为5μL～50μL。

作为优选，高效液相色谱检测的进样量为10μL。

在一些实施例中，高效液相色谱检测的柱压为30bar～110bar。