[发明专利]一种提取样品中奎尼酸的方法、试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明属于分析技术领域，涉及一种提取样品中奎尼酸的方法、试剂盒及其用途。

背景技术

奎尼酸(quinic acid，QA)是植物进行有氧呼吸过程中，经莽草酸途径形成的一种环状、多羟基及有光学活性的天然酚酸类化合物，又名1,3,4,5-四羟基环己烷-1-羧酸。奎尼酸的分子式为C₆H₇(OH)₄COOH，结构式如式Ⅰ所示。

奎尼酸广泛存在于各类植物中，例如烟草、金鸡纳树皮、胡萝卜叶、苹果、梨和咖啡等，而且，少数真菌和细菌中也存在奎尼酸。奎尼酸及其衍生物常被作为食品抗氧化剂使用；奎尼酸的咖啡酰类衍生物在抗病毒、治疗心血管疾病等方面得到较多关注和应用。因此，奎尼酸是提取价值极高的精细化工产品和医药中间体。

此外，奎尼酸在烟草中的含量较高，在0.05％-1％之间。奎尼酸对人体具有刺激性，且是有害成分酚类化合物的前体物，因此奎尼酸会对烟草感官品质产生不良影响，且会损害吸烟者的健康，亟需控制奎尼酸在烟草中的含量。

通常采用液相色谱法分析奎尼酸的含量，该法采用二极管阵列检测器。但该方法的检测时间较长，不利于快速检测。

目前尚无快速提取样品尤其是烟草及烟草制品中奎尼酸的方法。

发明内容

本发明人得到了一种快速提取样品中奎尼酸的方法，尤其适用于对烟草制品进行提取。该方法快速简单、选择性好、重现性好。发明人惊奇地发现以乙酸铵水溶液提取样品中的奎尼酸，前处理步骤简单、快速。此外，发明人还采用液相色谱-质谱联用法对奎尼酸进行快速分析检测，灵敏度高。

本发明第一方面涉及一种提取样品中奎尼酸的方法，包括如下步骤：用乙酸铵水溶液浸润样品，得到提取液。

所述浸润指乙酸铵水溶液与样品发生接触时，液体附着在样品表面或渗透到样品内部的现象。具体地，浸润时，乙酸铵水溶液液面至少为样品高度的1/3或至少为样品高度的1/2，优选，乙酸铵水溶液完全浸没样品。

本发明第一方面任一项的方法中，所述样品为烟草或烟草制品。

发明人发现，提取溶剂的选择对奎尼酸分析有显著影响，乙酸铵水溶液能将样品中的奎尼酸快速提取出来，提取率高且方法简单。而采用其他的磷酸钠缓冲溶液(NaH₂PO₄-Na₂HPO₄)、磷酸钾缓冲溶液(K₂HPO₄-KH₂PO₄)等无法对样品中的奎尼酸进行有效的提取。

本发明第一方面任一项的方法中，所述乙酸铵水溶液的浓度为0.09-0.15mol/L，具体为0.1-0.15mol/L或0.12-0.15mol/L，优选为0.1mol/L。

乙酸铵水溶液的浓度为0.09-0.15mol/L，可基本完全提取出样品中的奎尼酸。

本发明第一方面任一项的方法中，向每克样品中添加乙酸铵水溶液的量为250-1000mL，具体为250-500mL，更具体为250mL、300mL、500mL、750mL或1000mL，优选为500mL。

发明人发现，乙酸铵水溶液添加量过大时，信号微弱，容易受基线噪音的影响；添加量过小时，对于奎尼酸含量高的样品，容易出现信号值过饱和、测定不准确的问题。将乙酸铵水溶液添加量控制在250-1000mL/g，尤其是500mL/g，可以保有正常信号值，使测量准确，同时合适的乙酸铵水溶液添加量能够使奎尼酸被均匀提取出来。

本发明第一方面任一项的方法中，所述浸润在超声下进行；具体地，超声功率为最大功率的40％；更具体地，浸润时间≥10min，进一步具体地，浸润时间≥30min、≥40min或≥50min，优选为30min。

本发明第一方面任一项的方法中，浸润温度为30-60℃，具体为30℃、40℃、50℃或60℃，优选40℃。

本发明第一方面任一项的方法中，还包括将提取液进行过滤的步骤；具体地，以水相滤膜过滤提取液；更具体地，所述水相滤膜的孔径为0.22μm。

本发明第一方面任一项的方法中，还包括采用液相色谱-质谱分析提取液的步骤。

根据本发明任一的方法，液相色谱条件为如下(1)-(6)中的任意一项或者多项：

(1)色谱柱为菲罗门C₁₈液相色谱柱；

(2)进样量为5μL；

(3)流动相为0.1％醋酸水溶液；