[发明专利]杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法

权利要求书

1.杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、取经过预处理的杂种落叶松合子胚接种于BM改良培养基+2.0～2.5mg/L噻苯隆+1g/L肌醇+450mg/L谷氨酰胺+500mg/L水解酪蛋白+6.5g/L琼脂+30g/L蔗糖的培养基中，进行暗培养或光照培养至出现愈伤组织；

二、将愈伤组织接种于BM改良培养基+2.0～2.5mg/L噻苯隆的培养基中，在光照强度为33～36μmol·m^-2·s^-1，温度为23～25℃的环境中进行光照培养，至长出不定芽；

三、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入BM改良培养基+0.1～1.0mg/LTDZ+0～0.04mg/L NAA的培养基中培养，在光照强度为32～38μmol·m^-2·s^-1，温度为22～24℃的环境中进行光照培养，3周之后继代培养一次，进行不定芽伸长，当不定芽伸长至2～3cm，将其转入BM改良培养基+0.05～1.0mg/L6-BA+0.05～1.0mg/LNAA的培养基中培养，进行不定芽的抽茎；

四、将抽茎的不定芽转入1/2BM改良培养基+0.5mg/L IBA+1.0mg/L NAA的培养基，控制培养基中蔗糖浓度为20g·L^-1，在光照强度为32～38μmol·m^-2·s^-1，温度为22～24℃的环境中，进行光照培养以实现不定芽的生根；

所述BM改良培养基的组成为：NH₄NO₃ 200.0mg·L^-1、KNO₃ 909.9mg·L^-1、KH₂PO₄136.1mg·L^-1、Ca(NO₃)₂·4H₂O 236.2mg·L^-1、Mg(NO₃)₂·6H₂O 256.5mg·L^-1、MgCl₂·6H₂O 101.7mg·L^-1、MgSO₄·7H₂O 246mg·L^-1、KI 4.15mg·L^-1、H₃BO₃ 15.5mg·L^-1、MnSO₄·4H₂O 10.5mg·L^-1、ZnSO₄·7H₂O 14.688mg·L^-1、Na₂MoO₄·2H₂O 0.125mg·L^-1、CuSO₄·5H₂O 0.1725mg·L^-1、CoCl₂·6H₂O 0.125mg·L^-1、FeSO₄·7H₂O 2.78mg·L^-1、Na₂EDTA 3.73mg·L^-1、肌醇1000mg·L^-1、维生素B₁ 1.0mg·L^-1、维生素B₆ 1.0mg·L^-1、烟酸0.5mg·L^-1、甘氨酸2.0mg·L^-1和蒸馏水；

步骤四所述1/2BM改良培养基的组成为：NH₄NO₃ 100.0mg·L^-1、KNO₃ 454.95mg·L^-1、KH₂PO₄ 68.05mg·L^-1、Ca(NO₃)₂·4H₂O 118.1mg·L^-1、Mg(NO₃)₂·6H₂O 128.25mg·L^-1、MgCl₂·6H₂O 50.85mg·L^-1、MgSO₄·7H₂O 123mg·L^-1、KI 4.15mg·L^-1、H₃BO₃ 15.5mg·L^-1、MnSO₄·4H₂O 10.5mg·L^-1、ZnSO₄·7H₂O 14.688mg·L^-1、Na₂MoO₄·2H₂O 0.125mg·L^-1、CuSO₄·5H₂O 0.1725mg·L^-1、CoCl₂·6H₂O 0.125mg·L^-1、FeSO₄·7H₂O 2.78mg·L^-1、Na₂EDTA 3.73mg·L^-1、肌醇1000mg·L^-1、维生素B₁ 1.0mg·L^-1、维生素B₆ 1.0mg·L^-1、烟酸0.5mg·L^-1和甘氨酸2.0mg·L^-1。