[发明专利]一种检测样品中肌醇的方法、试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明属于分析技术领域，涉及一种检测样品中肌醇的方法、试剂盒及其用途。

背景技术

肌醇(Inositol)，又称1,2,3,4,5,6-环己六醇，最早从心肌和肝脏中分离得到，分子式为C₆H₁₂O₆，结构如式Ⅰ所示。

肌醇广泛分布在动植物体内，是参与新陈代谢活动的“生物活素”，具有免疫、预防和治疗某些疾病的作用。高等动物若缺乏肌醇，将会出现生长停滞和毛发脱落等现象，人体对肌醇的需求量是1-2g/天，许多保健饮料和儿童食品都添加有微量肌醇。肌醇还是肠内某些微生物的生长因子，在其它维生素缺乏时，它能刺激微生物合成所缺乏的维生素。在发酵和食品工业中，肌醇可用于多菌种培养、促进酵母增长。此外，烟草中的肌醇含量较高，在0.1％～1％之间，不同地区与品种的烟叶其肌醇含量略有差别。

目前，用于肌醇的检测方法主要有重量法、微生物法、高碘酸钾氧化法、示差折光法、高效液相色谱法和气相色谱法等，但这些方法均存在前处理步骤繁琐，检测时间较长等问题。其中，重量法易污染环境；微生物法前处理过程复杂；高碘酸钾氧化法不能排除邻二醇化合物的干扰、专属性较差；示差折光检测法所用仪器不稳定、干扰因素多；高效液相色谱法对于成分复杂样品分离效果差；采用气相色谱法，由于肌醇的沸点高，需进行柱前衍生化，将其制备成低沸点的酯类后才能测定，步骤较为繁琐。

目前尚需一种快速检测样品尤其是烟草或烟草制品中肌醇的方法。

发明内容

本发明人得到了一种快速检测样品中肌醇的方法，尤其适用于对肌醇含量较高的烟草或烟草制品进行检测，该方法快速准确、灵敏度高、选择性好、重现性好。而且，发明人惊奇地发现以乙酸铵水溶液提取样品中的肌醇，前处理步骤简单、快速。此外，发明人还首次采用液相色谱-质谱联用法对样品中的肌醇进行分析检测。

本发明第一方面涉及一种检测样品中肌醇的方法，包括如下步骤:用乙酸铵水溶液浸润样品，得到提取液。

所述浸润指乙酸铵水溶液与样品发生接触时，液体附着在样品表面或渗透到样品内部的现象。具体地，浸润时，乙酸铵水溶液液面至少为样品高度的1/3或至少为样品高度的1/2，优选，乙酸铵水溶液完全浸没样品。

本发明第一方面任一项的方法中，所述样品为烟草或烟草制品。

发明人发现，提取溶剂的选择对肌醇分析有显著影响，乙酸铵水溶液能将样品中的肌醇快速提取出来，提取率高且方法简单。而采用其他的磷酸钠缓冲溶液(NaH₂PO₄-Na₂HPO₄)、磷酸钾缓冲溶液(K₂HPO₄-KH₂PO₄)等无法对样品中的肌醇进行有效的提取分析。

根据本发明第一方面的方法，所述检测为定量检测。

本发明第一方面任一项的方法中，所述乙酸铵水溶液的浓度为0.09-0.15mol/L，具体为0.1-0.15mol/L或0.12-0.15mol/L，优选为0.1mol/L。

乙酸铵水溶液的浓度为0.09-0.15mol/L，可基本完全提取出样品中的肌醇。

本发明第一方面任一项的方法中，向每克样品中添加乙酸铵水溶液的量为250-1000mL，具体为250mL、500mL、750mL或1000mL，优选为500mL。

发明人发现，乙酸铵水溶液添加量过大时，信号微弱，容易受基线噪音的影响；添加量过小时，对于肌醇含量高的样品，容易出现信号值过饱和、测定不准确的问题。将乙酸铵水溶液添加量控制在250-1000mL/g,尤其是500mL/g，可以保有正常信号值，使测量准确，同时合适的乙酸铵水溶液添加量能够使肌醇被均匀提取出来。

本发明第一方面任一项的方法中，所述浸润在超声下进行；具体地，超声功率为最大功率的40％；更具体地，浸润时间≥10min，进一步具体地，浸润时间≥30min、≥40min或≥50min，优选为30min。

本发明第一方面任一项的方法中，浸润温度为30-60℃，具体为30℃、40℃、50℃或60℃。

本发明第一方面任一项的方法中，还包括将提取液进行过滤的步骤；具体地，以水相滤膜过滤提取液；更具体地，所述水相滤膜的孔径为0.22μm。

本发明第一方面任一项的方法中，还包括采用液相色谱-质谱分析提取液的步骤。