[发明专利]大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3的用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3的用途。

背景技术

棉花黄萎病是一种土传的维管束系统病害，是由大丽轮枝菌引起的，其对棉花的生产造成了严重的危害。自1935年，棉花黄萎病随着棉花种子的引进而传入我国，随后便开始逐渐蔓延全国。尤其从20世纪90年代以后，棉花黄萎病在我国扩展蔓延极为迅速，其中1993年棉花黄萎病最为严重，发病面积达266.67万hm²，随后在1995、1996、1999、2000、2002、2003年全国范围内连续爆发，损失十分严重，棉花黄萎病已对我国棉花生产以及可持续发展构成极大威胁。

棉花黄萎病是由半知菌亚门(Deutermycotina)淡色菌科(Mmonilaceae)轮枝菌属(Verticillium)真菌引起，属内有若干个种，其中危害棉花的有大丽轮枝菌(V.dahliae)和黑白轮枝菌(V.albo-atum)两个种。我国棉花黄萎病主要是由大丽轮枝菌引起的。大丽轮枝菌没有寄主专化性，可以危害多种植物，从一年生的草本植物到多年生的木本植物。大丽轮枝菌可以形成一种叫做黑色微菌核的休眠结构，可以在缺乏寄主的土壤中存活长达数年。

大丽轮枝菌主要以微菌核的形式越冬，微菌核作为其最主要的初侵染来源，在受到植物根部分泌物的刺激时便会萌发。菌丝一般从植物根部侵入，随着植物的蒸腾作用向植物的茎叶中扩展、定植，最终侵染整个植株。一般被大丽轮枝菌侵染过的植株都会表现出萎蔫，干枯，叶脉失色，坏死等症状，维管束变褐是黄萎病最典型的症状。

田黎等的研究认为棉花黄萎病的发生发展与土壤中微菌核的数量密切相关。大丽轮枝菌微菌核的多少通常与其致病力和抗逆性相关。有研究显示，当土壤里棉花黄萎菌微菌核达到0.03个/g土时，就会导致棉花出现萎蔫症状，当土壤中微菌核含量达到0.3个/g土～1.0个/g土时，就会有20％～50％的棉花植株发病，当土壤中微菌核含量达到3.5个/g土以上，棉花植株都会发病。另有研究表明，当土壤中微菌核含量达到0.5个/g土为引起棉花发病的临界值。在田里面，当黄萎菌侵染莴苣后，土壤中的微菌核数量为至少50个/g土，而病害很重的田块，微菌核数目高达2400个/g土。

棉花是目前世界上种植面积最大的工业原料作物，在我国是仅次于粮食的第二大农作物。棉花黄萎病是目前我国棉花生产过程中最具毁灭性的真菌病害。由于至今尚未研制出效果显著的防治药剂和抗病品种，被称为棉花的“癌症”，因此如何控制黄萎病的猖獗危害，已成为棉花生产可持续发展的关键问题。在这种情况下，研究大丽轮枝菌的致病机理，了解大丽轮枝菌与寄主的互作机理就显得更为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3或其基因。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种制备分生孢子产量降低的重组大丽轮枝菌的方法。

本发明所提供的一种制备分生孢子产量降低的重组大丽轮枝菌的方法，是抑制目的大丽轮枝菌中大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3的基因的表达，得到分生孢子产量低于所述目的大丽轮枝菌的重组大丽轮枝菌；

所述大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3为a)或b)：

a)氨基酸序列是SEQ ID No.1所示的蛋白质；

b)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3活性的由a)衍生的蛋白质。

其中，SEQ ID No.1由312个氨基酸残基组成。

上述b)中所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述b)中所述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述b)中所述蛋白质的编码基因可通过将SEQ ID No.2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变得到的。

上述方法中，所述分生孢子产量降低的重组大丽轮枝菌的分生孢子产量低于所述目的大丽轮枝菌；所述目的大丽轮枝菌为含有所述大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3的基因的大丽轮枝菌，如大丽轮枝菌野生型菌株V592。