[发明专利]HMG-CoA还原酶的两个B细胞表位及包含其中一个或两个表位的抗原肽

说明书

本发明公开了HMG‑COA还原酶的两个B细胞表位及包含其中一个或两个表位的抗原肽；这类抗原肽由HMG‑COA还原酶的一个或两个B表位与胰岛素瘤相关蛋白(IA‑2))近膜区JM2的B表位通过连接肽串联，串联后再通过连接肽与抗糖尿病的T表位P2的N端相连接。通过背部皮下免疫途径注射多次小剂量STZ诱导C57BL/6J小鼠的糖尿病模型，具有显著调脂和降血糖作用，同时显著降低血清HMG‑COA还原酶和尿酸水平，提高机体的抗氧化能力。本发明提供的抗原肽也可以用于重组微生物和转基因动物或植物，使它们作为生产工厂，生产该抗原肽或制作口服疫苗，用于糖尿病、调脂、动脉粥样硬化、氧化应激相关的疾病如糖尿病肾病、老年痴呆症以及痛风的治疗。

技术领域

本发明涉及药学及医学相关领域。特别涉及包含HMG-CoA还原酶中一个或两个B细胞表位的抗原肽及其在医药领域的应用。

背景技术

糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是以胰岛素相对或绝对不足为特征的代谢性疾病，胰岛素相对或绝对不足引发高血糖，进而导致三大营养物质代谢紊乱，胰岛素绝对缺乏为1型糖尿病，胰岛素相对缺乏为2型糖尿病。1型糖尿病(T1DM)是由T细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病，由于机体自身反应性免疫应答攻击胰岛β细胞，使其遭破坏、功能缺失，从而导致胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病。通过一定的免疫途径来诱导机体对致自身免疫性疾病自身抗原的耐受能有效预防自身免疫性疾病的发生。糖尿病带来的危害，几乎都来自它的并发症。

动脉粥样硬化是糖尿病的主要并发症，动脉粥样硬化常常伴随着血脂尤其是胆固醇的升高，体内过多的胆固醇会引起动脉粥样硬化等心脑血管疾病。HMG-CoA还原酶(3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶，EC：1.1.1.34)是肝细胞合成胆固醇过程中的限速酶，抑制HMG-CoA还原酶能阻碍内源性胆固醇合成。血清中胆固醇水平升高是心血管疾病的高危因素，因此通过抑制HMG-CoA还原酶活性来阻碍胆固醇的合成，可降低血胆固醇水平从而预防动脉粥样硬化。大量的临床研究表明，氧化应激在糖尿病及其并发症中具有重要的作用，氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体内活性氧自由基产生过多，氧化程度超出氧化产物的清除能力，氧化系统和抗氧化系统失衡，从而导致组织细胞的损伤。研究表明糖尿病及其血管并发症发生时，氧化应激明显增加。氧化应激也在糖尿病肾病、老年痴呆症以及痛风中起重要的作用。

P277肽是HSP60的437～460位的一段特异性多肽，共24个氨基酸，也是能与效应T细胞反应的抗原决定簇，是在T1DM中发挥作用的特异片段。为了增加肽的稳定性而不改变其免疫性质，将原始P277肽中位于该序列第6和11位的两个半胱氨酸C由两个结氨酸V来代替，命名为DiaPep277，我们研究发现DiaPep277在治疗模型中的降糖效果优于P277。已有实验研究发现按照国外DiaPep277相同的皮下给药方式，用P277肽进行给药，能引起血管内皮细胞损伤，并诱发肌体产生抗体从而诱发严重的动脉粥样硬化；将P277分成P1肽段(437～450)和P2肽段(448～460)两部分，发现P1多肽为诱发机体产生抗体的B表位肽段，具有促动脉粥样硬化作用，而P2为主要的抗糖尿病T表位肽段，没有诱发动脉粥样硬化。

蛋白抗原通过表位体现其免疫特异性。就某一蛋白抗原而言，不仅含有B细胞表位，T辅助细胞表位，细胞毒性T细胞表位，自然杀伤细胞表位等与免疫识别密切相关的结构，同时还含有毒性表位，交叉反应性表位等不良表位，这些不良表位可能引起免疫偏移等不良后果，因此为了提高蛋白质抗原的保护性，需要在表位水平上做出选择，以得到更理想的疫苗分子。已经证实P277中的P2段T表位肽段在治疗1型糖尿病中的关键性作用，我们运用B细胞表位预测软件以及在线预测工具，对糖尿病并发症动脉粥样硬化相关蛋白HMG-CoA还原酶进行B细胞抗原表位分析，合成包含HMG-CoA还原酶一个或者两个B细胞表位的抗原肽。

发明内容

本发明目的之一在于提供HMG-CoA还原酶线性B表位，具有SEQ ID No.1，SEQ IDNo.2所示氨基酸序列。