[发明专利]高效分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞A135株

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效分泌抗犬细小病毒（CPV）单克隆抗体杂交瘤细胞，属于生物技术领域。

背景技术

犬细小病毒病（Canine parvovirus disease，CPVD）是一种由犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）引起的以出血性肠炎或非化脓性心肌炎为主要特征的犬病毒性传染病，该病传染性强，死亡率高，各种年龄犬均可感染，幼犬的死亡率高达70%，由该病导致的经济损失巨大。尽管对易感犬广泛采取了CPVD疫苗接种，但由于CPV对外界的抵抗力强、易变异，目前仍是危害我国养犬业最为严重的传染病之一。

CPV（又称CPV-2）是1977年由美国学者从患出血性肠炎的犬腹泻粪便中分离得到的一种新型细小病毒，为了与1967年Binn从健康犬分离的非致病性犬极小病毒（minute virus of canine, MVC，又称CPV-1）相区别而被命名为CPV-2。CPV-2与MCV在致病性上显著不同，抗原性上也有明显差异。目前公认CPV只有1个抗原型，即CPV-2，但CPV-2在其出现后的几年时间内已发生了抗原漂移，在抗原性、宿主范围和血凝性上都发生了变化，其变异速度之快，在DNA病毒中是很少见的。现在CPV已出现了多个亚型，即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c（a）和CPV-2c（b），对动物的感染宿主谱（如：狐、貉等）也在扩大，严重威胁着家养和野生犬科及猫科动物的生存。

由于CPV的变异速度快，现有CPV疫苗的免疫效果有所下降。对临床发病犬追溯调查发现，免疫犬感染不同抗原型病毒的病例屡见不鲜，CPV-2 免疫犬对同型病毒( CPV-2) 中和抗体 ( SNAb) 水平明显高于异型，较多研究者认为低水平的SNAb 可能无法提供免疫犬对异型病毒的完全保护。此外，免疫犬感染发病的其他原因也不容忽视:①疫苗首次接种时幼犬体内残余的母源抗体限制了疫苗弱毒在其体内的复制。②疫苗接种后犬在“感染窗口期”内（约1-2周免疫产生期）遭受强毒的侵袭而感染。③某些品种、日龄的犬对强毒易感程度更高。

犬细小病毒病（CPVD）是一种由犬细小病毒（CPV）引起的以出血性肠炎或非化脓性心肌炎为主要特征的犬病毒性传染病，由该病导致的经济损失巨大。用抗CPV免疫血清或抗CPV单克隆抗体对患病犬进行治疗，可降低死亡率，减少经济损失。预防CPVD的主要手段是接种疫苗，对患病犬的治疗方法为给发病早期犬注射抗CPV血清或抗CPV单克隆抗体，同时辅助输液、输血、静脉注射犬免疫球蛋白或血白蛋白等，可以有效降低病死率。目前，市场上用本动物或异源动物制备的抗CPV免疫血清，质量不稳定、质控难、生产成本高，而且存在着外源病毒传入、感染患病犬的巨大风险，产生严重的生物安全问题；应用单克隆抗体治疗，可以降低上述风险，提高疗效，但现有的抗CPV单克隆抗体不仅中和效价（抗病毒活性）低，且对不同CPV亚型毒株的中和能力差异很大，对某些CPV亚型毒株没有中和活性。因此，在CPVD临床治疗上，亟需研制具有中和活性高、并且对不同的CPV亚型毒株都具有高中和能力的单克隆抗体。

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供一种高效分泌抗CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体不仅中和活性高，而且对不同的CPV亚型病毒株都具有高中和能力。

技术方案

一种高效分泌抗CPV单克隆抗体杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞A135株于2015年5月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉 武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201556，分类命名：杂交瘤细胞。

所述一种高效分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞A135株可以在制备犬细小病毒单克隆抗体治疗剂中得到应用

用所述杂交瘤细胞A135株制备的犬细小病毒单克隆抗体，再用所述的单克隆抗体制备犬细小病毒单克隆抗体治疗剂。

有益效果

本发明的特点和优点如下：

1. 本发明使用的BALB/c小鼠免疫原是用CPVD免疫发病犬体内分离的CPV当前流行强毒株（CPV-JS12株）制备。

2. 本发明从建立的178株分泌抗CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞库中筛选出一株杂交瘤细胞A135株，用其诱生的BALB/c小鼠腹水单克隆抗体对犬细小病毒的中和效价高达10¹⁰，抗CPV的生物学活性十分优良。