[发明专利]一种孔状石墨烯‑辣根过氧化酶修饰玻碳电极的制备方法

权利要求书

1.一种孔状石墨烯-辣根过氧化酶修饰玻碳电极的制备方法，其步骤为：

a. 制备氧化石墨烯

用修正的Hummers法制备氧化石墨烯：首先量取浓硫酸，冰水浴冷却至-4℃，搅拌条件下，依序缓慢加入石墨粉、硝酸钠和高锰酸钾，控制反应温度在8℃～12℃，搅拌反应2h；然后将混合液移入三口烧瓶，在30℃下继续搅拌30min，得到糊状物；保持搅拌不变，在糊状物中连续加入去离子水，升温至98℃，反应30min后，在搅拌下滴加30 % H₂O₂直至无气泡冒出，产物由棕褐色变为亮黄色；离心分离产物，分别用5 % 盐酸和蒸馏水离心洗涤产物，得氧化石墨；将制得的氧化石墨超声剥离，离心除去下层未剥离的氧化石墨，得到上层混合液即为氧化石墨烯；最后用0.22μm微孔滤膜过滤，水洗4次，低压冷冻干燥，将干燥后的氧化石墨烯配成1.0mg·mL^-1的分散液，待用；

b. 制备银纳米粒子-石墨烯复合材料

用“一锅法”制备银纳米粒子-石墨烯复合材料：称取十六烷基三甲基溴化铵溶解在水中，将十六烷基三甲基溴化铵水溶液与氧化石墨烯分散液混合超声1h，得到十六烷基三甲基溴化铵功能化的氧化石墨烯，备用；再将3 % 氨水滴入硝酸银水溶液中，直到产生的白色沉淀消失，制得银氨溶液；接着将银氨溶液滴入十六烷基三甲基溴化铵功能化的氧化石墨烯中，在N₂保护下充分搅拌2h，最后在搅拌下加入硼氢化钠水溶液，在80℃下反应12h，使银离子与氧化石墨烯一起还原，制得银纳米粒子-石墨烯复合材料；

产物用0.22μm微孔滤膜过滤，水洗4次，低压冷冻干燥，备用；

c. 制备孔状石墨烯

将制得的银纳米粒子-石墨烯复合材料超声分散在水中，加入硝酸溶液，在室温下搅拌4天，除去银纳米粒子；

最终产物用0.22μm微孔滤膜过滤，水洗4次，低压冷冻干燥，制得孔状石墨烯，备用；

d. 玻碳电极预处理

玻碳电极依次用0.30μm、0.05μm的三氧化二铝悬浊液抛光成镜面，再依次经体积分数为95 %的乙醇、二次蒸馏水超声清洗后，得到处理后的玻碳电极；插入含有1.0mM铁氰化钾探针分子的0.1M氯化钾电解质溶液中，并采用以玻碳电极为工作电极、铂柱为对电极、饱和甘汞电极为参比电极的三电极体系进行循环伏安扫描，对裸玻碳电极进行表征；再将电极取出用二次蒸馏水冲洗并吹干，备用；

e. 制备孔状石墨烯-辣根过氧化酶修饰电极

将c 步骤得到的孔状石墨烯滴涂在上述处理好的玻碳电极上，室温下干燥制得孔状石墨烯修饰玻碳电极；再将辣根过氧化酶滴涂在孔状石墨烯修饰玻碳电极上，室温下干燥制得孔状石墨烯-辣根过氧化酶修饰玻碳电极；

f. 采用步骤e所得到的孔状石墨烯-辣根过氧化酶修饰玻碳电极为工作电极、铂柱为对电极、饱和甘汞电极为参比电极，组成三电极体系，并将其共同浸入含有1.0mM H₂O₂的N₂饱和的0.2M pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中进行循环伏安扫描，得到HRP/PGN/GCE修饰电极对H₂O₂的循环伏安曲线；

g. 采用origin软件作图，绘制不同修饰电极在含有1.0mM H₂O₂的N₂饱和的0.2M pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中对H₂O₂的循环伏安图。