[发明专利]一种基于树状大分子的具有RGD靶向功能的CT成像纳米造影剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于CT成像造影剂领域，特别涉及一种基于树状大分子的具有RGD靶向功能的CT成像纳米造影剂的制备方法。

背景技术

RGD多肽因其能和整合素α_vβ₃特异结合，在调节肿瘤生长、血管生成及转移方面起到重要作用。近几十年来，随着纳米技术的不断发展，各种纳米颗粒应运而生，尤其是连接RGD的纳米颗粒，因为其本身的肿瘤细胞及肿瘤血管内皮细胞的双重靶向性能及与肿瘤相关的整合素的高亲和力，使其在靶向整合素的配体中有着广泛的应用。另外，金纳米颗粒由于其无细胞毒性、具有很好的化学稳定性、催化活性、生物相容性以及特殊的光学特性，使其可以很好的应用于蛋白质检测、光热治疗和体内疾病诊断等领域。然而单一的纳米颗粒有自身的缺点和局限性，因此寻找合适的方法合成多功能的复合纳米颗粒成为了当今纳米颗粒领域研究的重点。

Au DENPs复合纳米颗粒作为多功能复合纳米颗粒中的一种，已被验证了可以成功应用于细胞分离、抗菌和体内双模态成像等方面。在之前的研究中，公开了一种用于CT成像的增强生物相容性的用PEG修饰的Au DENPs。G5.NH₂事先用mPEG-COOH和通过PEG连接的配体RGD修饰，G5.NH₂-(PEG-RGD)₇-mPEG₈用作包裹Au纳米颗粒。将剩余的树状大分子终端乙酰化，可以获得靶向整合蛋白α_vβ₃的{(Au⁰)₃₀₀-G5.NHAc-(PEG-RGD)₇-mPEG₈}DENPs(PEGylatedAu DENPs-RGD)。PEGylatedAu DENPs-RGD靶向探针通过分别通过UV-Vis光谱、ICP-AES和TEM测定。在体外和体内分别通过乳腺癌细胞株(MDA-MB-435)和异种移植肿瘤模型评估靶向CT成像性能。PEGylatedAu DENPs-RGD探针的体内肿瘤摄入的组织学研究和MDA-MB-435的移植瘤的α_vβ₃整合素的表达确定了其为肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞的双重靶向纳米颗粒。在体内实验中，生物分布显示该靶向纳米探针可以在96h内被清除，这是第一个报道PEGylated Au DENPs连接整合素作为肿瘤靶向CT成像的探针。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于树状大分子的具有RGD靶向功能的CT成像纳米造影剂的制备方法，该方法不仅提高了纳米颗粒的稳定性和生物相容性，而且对整合素高表达癌细胞及肿瘤血管内皮细胞具有特异性的双重靶向作用；制备方法简单，反应条件温和，易于操作，具有产业化实施的前景。

本发明的一种基于树状大分子的具有RGD靶向功能的CT成像纳米造影剂的制备方法，包括：

(1)取RGD-PEG-COOH，加入二甲基亚砜DMSO溶解，然后加入EDC和NHS反应2～4h，再加入树状大分子G5.NH₂磁力搅拌反应2～4h，得到RGD-PEG修饰的树状大分子G5.NH₂；然后取mPEG-COOH，加入DMSO溶解，然后加入EDC和NHS反应2～4h；再加入RGD-PEG修饰的树状大分子G5.NH₂磁力搅拌反应2～4d，透析除去副产物和杂质，得到G5.NH₂-(PEG-RGD)₇-mPEG₈；