[发明专利]一种全量程C反应蛋白胶乳增强免疫比浊检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫学领域，涉及一种免疫检测试剂，具体来说涉及一种全量程C反应蛋白胶乳增强免疫比浊检测试剂盒。

背景技术

C-反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)由肝细胞合成，在胎儿期产生，非母体胎盘传递。其产生机理是：当机体受感染或组织受损伤时巨噬细胞和其他白细胞等被激活，产生白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF-a)等细胞因子及其他介导物，这些细胞因子和介导物到达肝脏，刺激肝细胞和上皮细胞合成CRP。C反应蛋白因检测方法灵敏度的不同，可分为普通CRP、超敏CRP(hs-CRP)、全量程CRP。普通CRP临床上主要用于评价感染、组织损伤和炎症性疾病，同时为炎症性疾病的诊断提供数据支持，也为疾病的治疗和监控提供了诊疗信息。超敏CRP是诊断低水平炎症状态的灵敏指标，同时血清hs-CRP水平与动脉粥样硬化及急性脑梗死(ACI)等心脑血管疾病的发生、严重程度及预后也密切相关。全量程CRP可用于评估疾病活动性和疗效监控，也可用于预示健康人未来发生心血管疾病的概率，还可用于评价疾病感染的程度。

所谓全量程CRP是基于其测定方法更敏感，测定范围更宽广而命名。临床常规测定CRP的方法为免疫比浊法，测定范围一般为3～200mg/L，但存在灵敏度相对较低，无法准确测定3mg/L以下水平的CRP含量，因此，无法作为心血管疾病的危险指标，预测健康人将来心血管疾病发生的危险性。临床超敏CRP测定范围为0.3～100mg/L，测定范围又相对较窄，无法准确测定高浓度水平的CRP含量，因此，无法用于感染性疾病的诊断或疗效观察。

发明内容

发明目的：为克服现有技术的上述不足，本发明提供一种既可以测定高浓度CRP含量、又可以测定低浓度CRP含量、且灵敏度高、稳定性强、线性范围宽、重复性好、价格便宜的全量程C反应蛋白胶乳增强免疫比浊检测试剂盒。

技术手段：为实现上述技术目的，本发明的技术方案为：一种全量程C反应蛋白胶乳增强免疫比浊检测试剂盒，该试剂盒包含试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为磷酸盐缓冲溶液；所述的试剂R2为两种不同粒径的羧基化聚苯乙烯胶乳分别与大鼠抗人CRP抗体及小鼠抗人CRP抗体交联形成的偶联物(包括平均粒径较大的羧基化聚苯乙烯胶乳和平均粒径较大的羧基化聚苯乙烯胶乳)。

其中，所述的两种不同粒径的羧基化聚苯乙烯胶乳分别为平均粒径范围为0.2μm～3μm的苯乙烯胶乳S1和0.005μm～0.2μm的苯乙烯胶乳S2。本发明所述的不同粒径的羧基化聚苯乙烯胶乳，其平均粒径在0.005μm～3μm之间，粒径小于0.005μm时，胶乳颗粒聚集产生的吸光度变化很小，结果很难实现试验敏感度的要求，且制备较为复杂，延长了生产时间，增加了试剂的生产成本且不利于重复性，但当粒径大于3μm的胶乳颗粒在测量高浓度检测物时，其聚集产生的吸光度变化超过了检测限，而且颗粒较大会加速自聚集，分散性降低。

本发明不同平均粒径的羧基化聚苯乙烯胶乳中，平均粒径较小的羧基化聚苯乙烯胶乳颗粒的粒径优先在0.008μm～0.2μm之间选择，更为优选地，粒径范围为0.08μm，以保证所制备的检测试剂盒使得抗原抗体反应试验能够在一个较宽的范围内进行，并且能够延长时间稳定。本发明中不同粒径的羧基化聚苯乙烯胶乳中，平均粒径较大的聚苯乙烯胶乳颗粒的最佳粒径优选为：0.2μm～2.8μm之间，更为优选地，粒径为0.198μm。

所述的全量程C反应蛋白胶乳增强免疫比浊检测试剂盒中包含C反应蛋白标准品，所述C反应蛋白标准品中C反应蛋白含量介于0～500mg/L。

所述的试剂R1为包含4wt％聚乙二醇、0.5wt％Nacl和0.05wt％TritonX-100的磷酸盐缓冲液。

其中，所述的试剂R2的制备方法如下：

(1)将大鼠抗人CRP抗体及小鼠抗人CRP抗体按照质量比为3:7～7:3的比例混合得到抗体混合物，混合后的溶液中，抗体浓度保持在5～20mg/ml；

(2)将步骤(1)得到的抗体混合物分别致敏两种不同粒径的羧基化聚苯乙烯胶乳，其中一种羧基化聚苯乙烯胶乳的平均粒径范围为0.2μm～3μm，另一种为0.005μm～0.2μm，分别将上述两种致敏的胶乳溶于0.15M、pH7.4缓冲液中形成试剂A和试剂B，将试剂A和试剂B混合，混合比例按胶乳的质量浓度小粒径：大粒径在900：100～999:1之间进行，得到试剂R2。