[发明专利]血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学及免疫学技术领域，尤其涉及血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。本发明提供了血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。该抗原表位氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，位于CDH5蛋白的N端，具有更高的保守性。本发明提供的表位是中和性表位，能够特异性的识别肿瘤血管并抑制其生成。本发明通过试验证实，该表位能够特异性识别肿瘤血管中的血管内皮钙黏蛋白，从而起到抑制肿瘤血管生成的作用。

技术领域

本发明涉及分子生物学及免疫学技术领域，尤其涉及血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。

背景技术

肿瘤血管是异常增生的血管。与正常血管相比，无论在结构还是功能方面都有很多差异。肿瘤新生血管分布不规则，血管扩张，管壁薄且有较少周细胞覆盖。肿瘤新生血管内皮不连续，有肿瘤细胞嵌入血管内皮形成马赛克结构，尽管异常弯曲的肿瘤血管通透性增加，但是运送氧气和营养物质的效率很低。由于肿瘤微环境的变化，血管内皮和基质细胞过度分泌和表达(或缺失)一些蛋白质分子，这些分子将成为肿瘤新生血管的标志分子。另外，细胞表面的膜受体所诱发的细胞信号通路也将成为重要的新靶标分子。因此，肿瘤血管靶向治疗成为肿瘤治疗的策略之一。

血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin，VE-cadherin),以下称为CDH5，是血管内皮细胞表面特异性表达的一种跨膜黏附蛋白，介导相邻内皮细胞之间的黏附，在保持血管完整性、调节内皮细胞间通透性、白细胞外渗以及细胞内信号转导中发挥着重要作用。除黏附特性外，CDH5还参与调节各种细胞内进程，如细胞增殖、细胞凋亡以及调节血管内皮生长因子受体的功能。CDH5属于Ⅱ型钙黏蛋白，分子量约为130kDa～140kDa，是由780个氨基酸组成的单链糖蛋白，由胞外区，跨膜区和胞浆区三部分组成。胞外区含110个氨基酸，由5个同源重复结构域和Ca²⁺结合序列组成，可介导钙依赖的细胞与细胞黏附，胞浆区通过胞内介导蛋白与细胞骨架相连。内皮细胞的完整性得以维持归功于细胞表面的粘附功能，如CDH5及其与相关细胞骨架相互作用的能力。这些相互作用的破坏将导致血浆成分渗漏进入周围组织，导致水肿。

抗原表位(epitope)是抗原分子中识别、结合抗体的基础，因此是检测抗体的实际有效组分。研究表明，根据识别的表位，CDH5抗体可能会破坏血管内皮细胞间的相互作用。但是，现有的CDH5抗体由于表位不恰当等原因， 在识别肿瘤血管的同时还会识别一部分正常的血管，如此便不能够特异性的与肿瘤血管结合并形成抑制作用。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供血管内皮钙黏蛋白抗原表位、抗体及其应用。本发明提供的表位是中和性表位，能够特异性的识别肿瘤血管并抑制其生成。

血管内皮钙黏蛋白抗原表位，该抗原表位氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供的血管内皮钙黏蛋白抗原表位的氨基酸序列为LDREVTPWYNLTVEA，位于CDH5蛋白的N端，具有更高的保守性。虽然，目前抗原表位可以利用生物信息学软件来预测，然而，越来越多的研究表明，软件预测抗原表位的错误概率较高，且软件对抗原表位的预测只针对目的抗原蛋白的全长，真正应用的过程中往往存在着特异性的问题，需要实验证实。而本发明通过试验证实，该表位能够特异性识别肿瘤血管中的血管内皮钙黏蛋白，从而起到抑制肿瘤血管生成的作用。

本发明还提供了编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子。

在本发明的实施例中，编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子具有如SEQ IDNO:2所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:2具有90％以上同源性，且能够表达SEQ ID NO:1所示氨基酸序列。

本发明提供的编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子，具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。