[发明专利]一种胸腔积液标本巴西诺卡氏菌选择培养基

说明书

技术领域

本发明涉及检验微生物培养领域，具体涉及一种用于胸腔积液标本的巴西诺卡氏菌选择培养基。

背景技术

微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体（如细胞或细菌等）而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。巴西诺卡氏菌(N.braziliensis)是需氧土壤腐生菌，属于诺卡氏菌属，放线菌门，该菌广泛存在于空气、尘埃、土壤和家畜体表，巴西诺卡氏菌毒性较强，致病力强，可引起暴发流行，多通过呼吸系统或原发感染,引起皮下组织及肺、脑等部位的慢性化脓性感染。巴西诺卡氏菌通过损伤的皮肤侵犯皮下组织，直接污染伤口,产生慢性化脓性肉芽肿，表现为肿胀、脓肿以及多发性瘘管，如足和腿部的所谓足分枝菌病，临床可表现为急性、亚急性或慢性过程，症状上与肺结核、皮肤结核、放线菌病、分枝菌病相似很容易误诊。

近年来，巴西诺卡氏菌病已不罕见，在有或无免疫异常的人群中均可发生。巴西诺卡氏菌生长缓慢、病程长，虽然发病率只有1%，但是死亡率却高达86%，早期诊断并时恰当的治疗，可以100%治愈，因此作为确诊唯一依据的临床细菌检查的正确与快速鉴定极为重要。目前，该菌属的鉴定金标准为PCR鉴定，但是PCR检测设备要求和操作成本均较高，因此临床培养多用普通血琼脂培养板（BAP）培养。而巴西诺卡氏菌属于苛养菌，即对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长。巴西诺卡氏菌初代培养生长缓慢，胸腔积液标本在血琼脂培养基上很容易被白色假丝酵母菌，金黄色葡萄球菌等真菌、杂菌覆盖，巴西诺卡菌无法生长，阳性率低，使用传统方法实验室培养48小时造成有60%巴西诺卡氏菌漏检，培养96小时以上阳性表现，1周左右方能较准确地做出鉴定，生化鉴定需要4~6周时间，结果延误时间，造成多处病灶转移，病死率升高。

发明内容

本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于胸腔积液标本巴西诺卡氏菌生长的选择培养基。

本发明解决其技术问题的技术方案是：一种胸腔积液标本巴西诺卡氏菌选择培养基，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：

牛肝粉5.0～15.0g；

麦芽浸粉2.0～5.0g；

酵母浸出粉5.0～10.0g；

氯化钠5.0g；

琼脂15.0～20.0g ；

乳酸亚铁0.01～0.05g；

葡萄糖酸锌钙0.01～0.05g；

萘啶酮酸0.01～0.05g；

毛子草酮0.001～0.005g；

天冬酰胺0.01～0.1g；

无菌脱纤维绵羊血80～100ml；

蒸馏水加至1000ml。

上述培养基的制备方法为：称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸亚铁；葡萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀蒸馏水溶解，280℃，灭菌15min，冷却到45℃，加入灭菌萘啶酮酸；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。

优化方案中，每1000ml培养基还含有酪蛋白磷酸肽0.1～0.5g。

优化方案中，每1000ml培养基还含有维生素K₁ 0.01～0.1g。

优化方案中，每1000ml培养基还含有浓度200g/L的生地黄水煮液 200～300ml。

上述优化方案的培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取生地黄加水煮沸30-60min，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得生地黄水煮液；

（2）称取牛肝粉；麦芽浸粉；酵母浸出粉；氯化钠；琼脂；乳酸亚铁；葡萄糖酸锌钙；毛子草酮；天冬酰胺混匀溶于步骤（1）所得的生地黄提取液中混匀，280℃灭菌15min，冷却到45℃，加入灭菌萘啶酮酸；灭菌维生素K₁；灭菌络蛋白磷酸肽；无菌脱纤维绵羊血混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。