[发明专利]离子交换色谱法用洗脱液以及核酸链的分析方法

说明书

本申请是国际申请日为2012年01月12日、申请号为201280005112.5、发明名称为“离子交换色谱法用洗脱液以及核酸链的分析方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于核酸的PCR扩增产物、该PCR扩增产物的限制性内切酶片段、或核酸的限制性内切酶片段等目标核酸的分离检测中的离子交换色谱法用洗脱液。另外，本发明涉及通过使用了该洗脱液的离子交换色谱法的核酸链的分析方法。

背景技术

离子交换色谱法是利用在柱填充剂的离子交换基团与测定对象物质中的离子之间发挥作用的静电相互作用来分离测定对象物质的方法。

特别是由于对核酸、蛋白质、多糖类这样的生物体高分子的分离优良，因此，在生物化学和医学等领域中被利用。

离子交换色谱法中具有利用阴离子交换的色谱法和利用阳离子交换的色谱法。阴离子交换使用阳离子性的柱填充剂，能够分离阴离子性的物质。相反，阳离子交换使用阴离子性的柱填充剂，能够分离阳离子性的物质。

作为阴离子交换柱填充剂的阳离子性的官能团，有二乙氨基乙基这样的弱阳离子性基团、季铵基这样的强阳离子性基团，这些具有阳离子性的官能团的阴离子交换柱填充剂已经被市售，在各种研究领域中使用。

核酸是由碱、糖、磷酸构成的核苷酸用磷酸酯键连接的生物体高分子，根据糖结构的不同，分类成脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。

在使用离子交换色谱法分离核酸的PCR扩增产物、该PCR扩增产物的限制性内切酶片段、核酸的限制性内切酶片段等目标核酸的情况下，使用利用在该目标核酸分子中包含的磷酸的负电荷的阴离子交换液体色谱法，按链长能够分离检测该PCR扩增产物、核酸片段等目标核酸。

作为按链长分离核酸链的方法，广泛使用凝胶电泳法，但作业烦杂，或测定耗费时间等，有许多改善的余地。非专利文献1中公开了通过高效液相色谱法分离核酸相关化合物的方法，如果使用该方法，则不需要烦杂的作业，能够短时间按链长分离检测核酸链。但是，存在难以充分地分离接近的链长差的问题，因此，要求进一步的分离性能的提高。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：“ライフサイエンスのための高速液体クロマトグラフィー基礎と実験(用于生命科学的高效液相色谱法基础与实验)”、广川书店、p.323

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于，提供能够在短时间并且以高分离性能进行核酸的PCR扩增产物、该PCR扩增产物的限制性内切酶片段、核酸的限制性内切酶片段等目标核酸的分离检测的离子交换色谱法用洗脱液。另外，本发明的目的在于，提供通过使用了该洗脱液的离子交换色谱法进行的核酸链的分析方法。

用于解决课题的方法

本发明是含有由下述式(1)所示的胍衍生的胍盐的离子交换色谱法用洗脱液。以下详细说明本发明。

本发明人发现，通过在用于离子交换色谱法的洗脱液中添加胍盐，能够提高核酸链不同的试剂的分离性能，从而完成了本发明。

本发明的离子交换色谱法用洗脱液含有由上述式(1)所示的胍衍生的胍盐。

作为上述胍盐，可以列举例如：胍盐酸盐、胍硫酸盐、胍硝酸盐、胍碳酸盐、胍磷酸酯、胍硫氰酸盐、胍氨基磺酸盐、氨基胍盐酸盐、氨基胍碳酸氢盐等。其中，优选使用胍盐酸盐、胍硫酸盐。

本发明的离子交换色谱法用洗脱液中的胍盐的分析时的浓度，根据分析对象物适当调节即可，但优选为2000mmol/L以下。

具体而言，可以列举：使胍盐的浓度在0～2000mmol/L的范围内进行梯度溶出的方法。因此，分析开始时的胍盐的浓度无需为0mmol/L，另外，分析结束时的胍盐的盐浓度也无需为2000mmol/L。

上述梯度溶出的方法可以为低压梯度法也可以为高压梯度法，但优选在进行利用高压梯度法的精密的浓度调节的同时使其溶出的方法。

上述胍盐可以单独添加到洗脱液中，也可以与其他盐组合添加。作为能够与上述胍盐组合使用的盐，可以列举例如：由氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾等卤化物和碱金属构成的盐、由氯化钙、溴化钙、氯化镁、溴化镁等卤化物和碱土金属构成的盐、高氯酸钠、高氯酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸铵、硝酸钠、硝酸钾等无机酸盐等。另外，也可以使用乙酸钠、乙酸钾、琥珀酸钠、琥珀酸钾等有机酸盐。