[发明专利]一种检测不同种类硫酸盐还原菌的方法

权利要求书

1.一种检测不同种类硫酸盐还原菌(SRB)的方法，其特征在于：利用基于磁性微球及寡核苷酸探针对不同种类SRB特异性DNA片段为目标检测物，间接对SRB进行荧光检测。

2.按权利要求1所述的检测不同种类硫酸盐还原菌(SRB)的方法，其特征在于：所述磁性微球及寡核苷酸探针为亲和素修饰的磁珠与生物素修饰的捕获探针DNA 1、信号探针DNA 2,以及不同种类硫酸盐还原菌特异性DNA杂交获得；

其中，磁性微球-捕获探针DNA1与目标检测物DNA链部分片段结合形成双链，目标检测物DNA单链未结合部分与DNA2信号探针结合。

3.按权利要求1所述的检测不同种类硫酸盐还原菌(SRB)的方法，其特征在于：所述杂交条件为将磁性微球-捕获探针、荧光信号探针及不同浓度SRB特异性DNA片段按1:1:1的体积比混合,于37-40℃摇床孵育30-60分钟。

4.按权利要求1或2所述的检测不同种类硫酸盐还原菌(SRB)的方法，其特征在于：所述不同种类硫酸盐还原菌特异性DNA为将SRB种群于SRB选择性培养基上在25-40℃，隔绝空气条件下进行富集，然后将SRB细菌进行清洗并利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌DNA；

以利用不同种类的SRB特异性引物对上述提取的细菌DNA进行聚合酶链式反应(PCR)扩增得到细菌特异性DNA片段。

5.按权利要求4所述的检测不同种类硫酸盐还原菌(SRB)的方法，其特征在于：所用SRB选择性培养基配方为：1升陈海水中加入0.4-1.0克NaSO₄，0.2-0.6克K₂HPO₃，1.0-2.0克NH₄Cl，0.1-0.5克CaCl₂，1.5-4.0克MgSO₄，1.0-3.0克酵母浸出膏，3-5毫升乳酸钠。

6.按权利要求4所述的检测不同种类硫酸盐还原菌(SRB)的方法，其特征在于：所述聚合酶链式反应用量为模板DNA,5.0-6.0μL；超纯水,10.0-16.0μL；聚合酶缓冲溶液,1.0-3.0μL；三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs),0.5-1.0μL；上游引物,1.0-2.0μL；下游引物,0.5-2.0μL；耐热DNA聚合酶,0.2-0.5μL；或所述上下游引物的用量相反；

反应条件为：复制起始(94℃,5-10min)；35个循环变性(94℃,30-60s),退火处理(55℃,30-60s),延伸(94℃,30-60s)；终止(72℃,7-10min)。

7.按权利要求1所述的检测不同种类硫酸盐还原菌(SRB)的方法，其特征在于：所述荧光检测是将信号收集于流失细胞仪(BD FACS AriaⅡ)，激光光源为25mW，639nm，分析速度为10000events/s。