[发明专利]一种简易无菌植培箱及其应用

说明书

技术领域

本发明属于无菌植培领域，尤其涉及一种简易无菌植培箱及其在无菌培养中的应用。

背景技术

微生物参与氧化、硝化、氨化、固氮、硫化过程，促进自然土壤中有机物质的分解和养分的转化，且其在土壤、水体及空气中均广泛分布。土壤具备了各种微生物生长发育所需要的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活的良好环境，因此在土壤中微生物数量最大，类型最多。淡水中的微生物多来自于土壤、空气、污水或动植物尸体等，尤其是土壤中的微生物，常随土壤被雨水冲刷进入江河、湖泊中。空气中含有一定数量来自土壤、生物和水体等的微生物，它是以尘埃、微粒等方式由气流带来的。因此，微生物的分布极为广泛，无处不在。

然而，特定的生产及科研则需要完全无菌的环境。例如铁皮石斛的工厂化育苗大多采用无菌组培的方法，若感染微生物则会导致组织的腐烂。在研究植物吸收氨基酸的培养试验中，因为氨基酸在微生物的作用下会迅速分解，则需要完全无菌的环境。在测定土壤中某些有机化合物的迁移转化规律时，为避免微生物的分解，也要抑制微生物的活动。因此就需要可以长期保持无菌环境的培养箱及其无菌培养方法。

现有技术中，长期开放系统中无菌培养的简易装置还相对缺乏。有少量的国内外实验室可以做到无菌的环境，但其存在着建造维护成本较高、因面积大微生物易侵染、操作人员易带菌进入的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种简易无菌植培箱及其无菌培养方法，由箱体、日光灯、紫外灯、第一空气过滤器、抽气泵、培养管、培养底座、第二空气过滤器、高效空气过滤器、第一注射器、第三空气过滤器、进水管、出水管、第四空气过滤器、第二注射器组成，培养管插在培养底座上并放置在箱体内，箱体顶部内置安装有日光灯、紫外灯，箱体一侧依次安装第二空气过滤器和高效空气过滤器，另一侧依次安装第一空气过滤器和抽气泵，进水管一端位于培养管的上方，进水管的另一端穿过箱体侧壁依次与第三空气过滤器、第一注射器连接，培养管的底部连接出水管，出水管的另一端穿出箱体侧壁依次与第四空气过滤器和第二注射器连接。

第一空气过滤器、第二空气过滤器、第三空气过滤器、第四空气过滤器内膜孔径均为0.22μm，高效空气过滤器采用超细玻璃纤维纸作滤料，主要用于捕集0.5um以下的颗粒灰尘及各种悬浮物，防止空气颗粒堵塞第二空气过滤器。

本发明的另一个目的是提供所述的简易无菌植培箱在无菌营养液培养植物种子中的应用。通过以下步骤实现：

1) 将植物种子采用乙醇、过氧化氢、氯化汞单一或者组合灭菌，放置于高温高压灭菌的培养皿中发芽；

2) 将箱体转移到无菌操作台上，打开紫外灯，对箱体灭菌24h；

3) 待种子根系生长到1.5cm左右，将其转移至装满0.5%琼脂的培养管中，培养管盖子上有一直径0.5cm左右的小孔，移植2天后，用南大704硅橡胶密封小孔，可以起到支撑及隔绝微生物的作用，移植3-5天后，将种子苗转移到装有营养液的培养管中培养，上述操作均在无菌操作台上进行，所有用到的器具均采用高温高压灭菌；

4) 打开抽气泵，打开日光灯，将箱体转移到洁净的台面上；

5）三天后，采用第二注射器将培养管中营养液吸出，通过第一注射器向培养管中添加新的营养液，之后根据植物长势定期更换营养液，如使用时间过长，应及时更换空气过滤器。

本发明的再一个目的是提供所述的简易无菌植培箱在无菌土壤培养植物种子中的应用。通过以下步骤实现：

1) 将植物种子采用乙醇、过氧化氢、氯化汞单一或者组合灭菌，放置于高温高压灭菌的培养皿中发芽；

2) 将箱体转移到无菌操作台上，打开紫外灯，对箱体灭菌24h；

3) 土壤采用121℃灭菌30min，反复灭菌几次以彻底杀灭土壤中微生物，或采用专利号为ZL201420668133.1的土壤灭菌装置进行灭菌，将催芽后的种子种植于装满灭菌土壤的培养管中，通过第一注射器向土壤中添加水分，上述操作均在无菌操作台上进行，所有用到的器具均采用高温高压灭菌；

4) 打开抽气泵，打开日光灯，将箱体转移到洁净的台面上；

5）培养过程中根据土壤干湿情况采用第一注射器向土壤中添加水分，培养过程中尽量避免过量添加水分，如需将土壤中水分吸出，则可采用第二注射器将培养管中多余水分吸出，如使用时间过长（超过25天），应及时更换空气过滤器。

所述营养液为霍格兰营养液配方、山崎营养液配方或两者的改性配方。