[发明专利]一种检测牛LPL基因mRNA表达水平的特异性引物和荧光定量检测试剂盒

权利要求书

1.一种牛LPL基因mRNA表达水平的荧光定量PCR检测试剂盒的使用方法，其特征在于：是以待测cDNA为模板，利用荧光定量PCR检测试剂盒进行实时荧光定量PCR，记录Ct值，并以LPL标准基因作为阳性对照绘制标准曲线，据此标准曲线和Ct值进行定量测定；

所述荧光定量PCR检测试剂盒由以下组分组成：

2×SYBR GREEN MIX 5ml；

阳性对照：标准LPL基因模板 500μL；

引物混合液 500μL；

超纯水 5mL；

其中，2×SYBR GREEN MIX由以下组分组成：Taq DNA聚合酶0.1 U/μL、dNTPs底物0.4mmol/L、Mg²⁺ 5.0 mmol/L、KCl 100 mmol/L、pH8.3的Tris·HCl 20 mmol/L、质量百分含量为0.02%的明胶和SYBR Green染料；

所述引物混合液中：上游引物的浓度为8 μmol/L、下游引物的浓度为8 μmol/L；

上游引物序列为：5’-CCGCAGACAGGATTACAG-3’；

下游引物序列为：5’-AGGAATGAGGTGGCAAGT-3’；

所述阳性对照：标准LPL基因模板的浓度为0.8 μmol/L，所述阳性对照的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.3；

所述实时荧光定量PCR的反应条件是：95℃预变性30秒；95℃ 5秒，58.0℃ 20秒，捕捉荧光信号，循环40次。

2.根据权利要求1所述的使用方法，其特征在于：所述牛为黄牛、奶牛和牦牛。

3.一种牛LPL基因mRNA表达水平的定量检测方法，其特征在于：是以待测cDNA为模板，利用荧光定量PCR检测试剂盒进行实时荧光定量PCR，记录Ct值，并以LPL标准基因作为阳性对照绘制标准曲线，据此标准曲线和Ct值进行定量测定；

所述检测试剂盒由以下组分组成：

2×SYBR GREEN MIX 5ml；

阳性对照：标准LPL基因模板 500μL；

引物混合液 500μL；

超纯水 5mL；

其中，2×SYBR GREEN MIX由以下组分组成：Taq DNA聚合酶0.1 U/μL、dNTPs底物0.4mmol/L、Mg²⁺ 5.0 mmol/L、KCl 100 mmol/L、pH8.3的Tris·HCl 20 mmol/L、质量百分含量为0.02%的明胶和SYBR Green染料；

所述引物混合液中：上游引物的浓度为8 μmol/L、下游引物的浓度为8 μmol/L；

上游引物序列为：5’-CCGCAGACAGGATTACAG-3’；

下游引物序列为：5’-AGGAATGAGGTGGCAAGT-3’；

所述阳性对照：标准LPL基因模板的浓度为0.8 μmol/L，所述阳性对照的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.3；

所述实时荧光定量PCR的反应条件是：95℃预变性30秒；95℃ 5秒，58.0℃ 20秒，捕捉荧光信号，循环40次。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述牛为黄牛、奶牛和牦牛。