[发明专利]一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法在审
| 申请号： | 201510311719.1 | 申请日： | 2015-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN104894071A | 公开（公告）日： | 2015-09-09 |
| 发明（设计）人： | 王斯佳;周宇荀;邓倩云;李晓宁;李文文;肖君华;李凯 | 申请（专利权）人： | 东华大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 gt1 细胞 进行 基因 编辑 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法，包括：
将GT1-7细胞铺于24孔板中；待细胞贴壁生长，利用Lipo2000法将含有Cas9基因和嘌呤霉素抗性基因的42229质粒转染进入GT1-7细胞系；待细胞表达嘌呤霉素基因，用终浓度0.3ug/ml的嘌呤霉素筛选42229转染GT1-7细胞；筛选后，去除含有嘌呤霉素的培养基，更换成正常高糖培养基，并进行扩大培养，待培养板中的GT1-7细胞长满，消化转移到培养瓶中继续扩大培养，即得Cas9稳转GT1-7细胞。
2.根据权利要求1所述的一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法，其特征在于：所述GT1-7细胞铺于24孔板具体参数为每个孔15万个细胞，铺6个孔。
3.根据权利要求1所述的一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法，其特征在于：所述42229质粒与Lipo2000的浓度配比分别为500ng/1.5ul、700ng/1.5ul、500ng/2.0ul、700ng/2.0ul和两个阴性对照。
4.根据权利要求1所述的一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法，其特征在于：所述嘌呤霉素筛选时间为9～10天。
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