[发明专利]基于MassARRAY质谱平台Iplex分析的肺癌基因谱检测方法及试剂盒与应用

权利要求书

1.一种基于MassARRAY质谱平台Iplex分析的肺癌基因谱检测方法，其特征在于能检测肺癌13种驱动和耐药相关基因的99种热点变异位点，包括如下步骤：

(1)设计如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.198所示的扩增引物和如SEQ ID NO.199～SEQ ID NO.297所示的延伸引物；

(2)将如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.198所示的扩增引物分为12组，扩增引物名称末尾为P1-F和P1-R为第1组，扩增引物名称末尾为P2-F和P2-R为第2组，类推，分为12组；将分组后的扩增引物混合，得到12管扩增引物混合液；将如SEQ ID NO.199～SEQ ID NO.297所示的延伸引物进行分组，延伸引物名称末尾为E1的延伸引物混合得到第1管延伸引物混合物，延伸引物名称末尾为E2的延伸引物混合得到第2管延伸引物混合物，类推，得到11管延伸引物混合物和1管单独延伸引物，共计12管；

(3)以人肺组织基因组为模板，将12管扩增引物混合液分别进行PCR，获得PCR产物；

(4)将步骤(3)获得的PCR产物进行碱性磷酸酶消化；

(5)将步骤(4)消化后的产物进行延伸反应：12管扩增引物得到的产物分别对应12管延伸引物，P1对应E1，以此类推；

(6)在96孔板或384孔板将步骤(5)延伸反应后得到的产物、清洁树脂和水混合；旋转96孔板或384孔板进行脱盐去离子防干扰处理；接着离心；对上清进行分析；

(7)MassARRAY系统Nanodispenser点样仪进行芯片点样，利用Analyzer分析仪芯片扫描；扫描结果以Typer4.0软件分析各目的基因的突变状况，在质谱峰变异碱基处出现峰，则判断为突变。

2.根据权利要求1所述基于MassARRAY质谱平台Iplex分析的肺癌基因谱检测方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的扩增引物混合物中的扩增引物为按等摩尔比混合；

步骤(2)中所述的延伸引物混合物中的延伸引物为按如下摩尔比混合：

第1管：如SEQ ID NO.199～SEQ ID NO.208所示的延伸引物的摩尔比为7.04：7.36：8.05：8.30：9.10：9.34：10.12：10.35：10.91：11.11；

第2管：如SEQ ID NO.209～SEQ ID NO.218所示的延伸引物的浓度分别依次为6.83：7.11：7.84：8.05：8.93：9.16：9.76：9.94：10.42：10.90；

第3管：如SEQ ID NO.219～SEQ ID NO.228所示的延伸引物的浓度分别依次为7.01：7.74：7.99：8.69：8.96：9.60：9.84：10.41：10.66：11.20；

第4管：如SEQ ID NO.229～SEQ ID NO.238所示的延伸引物的浓度分别依次为6.89：7.18：7.89：8.55：9.44：9.58：10.15：10.40：11.02：11.20；

第5管：如SEQ ID NO.239～SEQ ID NO.248所示的延伸引物的浓度分别依次为6.94：7.28：7.59：8.34：8.59：9.44：9.63：10.30：10.45：11.16；

第6管：如SEQ ID NO.249～SEQ ID NO.258所示的延伸引物的浓度分别依次为6.94：7.67：8.34：8.57：9.31：9.47：10.03：10.26：10.91：11.11；

第7管：如SEQ ID NO.259～SEQ ID NO.268所示的延伸引物的浓度分别依次为7.05：7.35：8.11：8.95：9.18：9.80：9.99：10.52：11.01：11.22；

第8管：如SEQ ID NO.269～SEQ ID NO.278所示的延伸引物的浓度分别依次为6.87：7.12：8.09：8.74：9.00：9.69：10.42：10.65：11.13：11.29；

第9管：如SEQ ID NO.279～SEQ ID NO.285所示的延伸引物的浓度分别依次为7.11：8.04：8.72：8.93：9.63：10.34：11.10；

第10管：如SEQ ID NO.286～SEQ ID NO.291所示的延伸引物的浓度分别依次为6.90：7.97：8.14：9.11：9.90：10.74；

第11管：如SEQ ID NO.292～SEQ ID NO.296所示的延伸引物的浓度分别依次为7.10：8.14：9.20：10.09：10.85。