[发明专利]一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法

说明书

技术领域

    本发明属于食品安全技术和分析化学技术领域，涉及一种检测样品中氯霉素浓度的方法，特别涉及一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法。

背景技术

氯霉素是一种白色针状的结晶粉末，在水溶液中比较稳定难以分解，作为一种广谱抗菌素，它可以与核糖体结合，达到抑制细菌蛋白质合成的作用。因其效高价廉，在畜牧业中得到广泛的应用。但是氯霉素具有较强的副作用和毒性，长期接触容易导致再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症，此外，长期微量摄入氯霉素，也可使大肠杆菌、沙门氏菌等产生耐药性，引起机体正常菌落的失调，是人们易感染各种疾病。氯霉素可在食用动物中残留，可通过食物链传给人类，对人类的健康造成危害。世界上许多国家禁止此药用于生产食品动物，并规定了其在畜产品中最高残留限量。发达国家对检出限的要求越来越严格，其检测限问题已成为人们关注的焦点。目前氯霉素的检测方法分为微生物法、 免疫分析方法、色谱法和其他方法。

核酸适配体是通过指数富集配体的系统进化技术( SELEX) 筛选而来的，选择性地绑定到各种具有高亲和力的目标物如小分子、蛋白质和药物等。与传统的分子识别系统相比，核酸适配体由于易合成而有很大的优势，而且其容易被标记，可以长期稳定存储，具有优良的稳定性,、广泛的适用性以及高敏感特性。因此,它们的优异属性使其在医学诊断、环境监测、生物分析方面的应用有很大潜力。金纳米粒子具有独特的光学特性和较好的生物相容性，已在共振散射光谱，紫外吸收光谱等分析中得到应用，已有研究基于核酸适配体修饰的纳米金与共振瑞利散射光谱，实现了对靶分子、等的高灵敏度高选择性的检测。基于氯金酸制备得到的纳米金溶液呈现出酒红色，少量的电解质存在时能诱导金纳米颗粒团聚，相对应的溶液的颜色会从酒红色逐渐变为蓝紫色。所以在金纳米溶液中加入适量的阳离子聚合物时会引起溶液吸光度的变化。

基于氯霉素与其对应核酸适配体的特异作用，阳离子聚合物性质和金纳米特性分析可知：阳离子聚合物与核酸适配体能够形成稳定的复合物，不能引起金纳米颗粒的聚集。但在氯霉素存在下，核酸适配体优先与氯霉素结合形成发夹结构，从而不能结合阳离子聚合物。溶液中多余的阳离子聚合物会引起金纳米颗粒的聚集，导致体系的紫外吸收值发生变化。因此，结合体系产生吸光信号的强度与氯霉素浓度的关系，本实验研究结合以上原理设计一种测定氯霉素的生物比色传感新方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法，用以实现溶液中氯霉素的简单、快速、高灵敏检测。

本发明通过以下技术方案来实现：一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法，包括：

（1）将金纳米颗粒、能够对氯霉素特异性识别的核酸适配体和阳离子聚合物混合，阳离子聚合物和核酸适配体形成稳定的复合物；

（2）将待测样品和上述混合物混合，待测样品中的氯霉素与核酸适配体形成稳定的发夹结构，释放出阳离子聚合物；

（3）金纳米颗粒在阳离子聚合物的作用下团聚成较大颗粒，导致不同波长处的紫外吸收峰强度减弱或增强以及相对应的颜色变化；

（4）基于步骤（3）中颜色的变化，确定所述样品中的氯霉素浓度。

进一步的，所述的能够对氯霉素特异性识别的核酸适配体的DNA序列具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。由此，可以进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。

进一步的，所述的核酸适配体的浓度为15nM。由此，可以进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。

进一步的，所述的阳离子聚合物选用PDDA。由此，可以进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。

进一步的，所述的PDDA的浓度为15nM。由此，可以进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。

进一步的，所述的氯霉素浓度为0-10000 nM。由此，可以进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。

进一步的，所述的氯霉素浓度为50-4000 nM。由此，可以进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。

进一步的，基于下列线性方程，确定所述样品中氯霉素的浓度：

Y=0.3056LOG(C)-0.1282，

(Y=A₆₈₀/A₅₂₀）为不同氯霉素浓度下紫外吸收值比率，C为相应氯霉素的浓度。由此，可以进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。