[发明专利]一种适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法

权利要求书

1.一种适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：包括步骤如下：

(1)蛤仔亲贝的选择及促熟：选取滩涂采捕亲贝，在室内升温促熟，达到性腺充分成熟；

(2)亲贝处理及配子排放；将亲贝置入砂滤海水中进行催产，然后将开始排放配子的亲贝选出，单个置于烧杯中排放配子，获得多杯卵液和多杯精液；

(3)卵液选择及处理；镜检上述步骤(2)获得多杯卵液中的每杯卵液，选择发育良好的多杯卵液进行合并，卵子悬浮液以90μm筛绢过滤去除组织碎片，以30μm筛绢清洗3次，收集卵子，置入塑料烧杯备用；

(4)精液选择及处理；镜检上述步骤(2)获得多杯精液中的每杯精液，选取活力良好的一杯，用30μm筛绢滤除组织碎片，作为备用精子；

(5)同步受精，镜检及分组；取上述备用精子加入到上述步骤(3)的卵子悬浮液中，精卵比为3:1-5:1，然后将受精卵分成处理组和对照组；

(6)在处理组的受精卵中加入细胞松弛素B；观察对照组受精卵出现第一极体的比例达到总卵数的80％时，迅速向处理组加入细胞松弛素B至终浓度为0.5mg/L；

(7)去除受精卵溶液中的细胞松弛素B及孵化；观察对照组中80％至90％的第一极体下方出现第二极体时，以30μm筛绢洗卵，砂滤海水清洗，去除细胞松弛素B，然后孵化发育至担轮幼虫或D形幼虫。

2.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所述步骤(1)中亲贝为3龄蛤仔，壳长大于40mm。

3.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所述步骤(2)中的砂滤海水为经紫外线照射处理30min至60min的砂滤海水。

4.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所述步骤(3)中发育良好的卵液为卵子的卵膜完整、规格一致、形状呈规则球形、分散度良好；所述步骤(4)中活力良好的精子是指镜下检查，大于90％的精子具有正常活动能力，且分散度良好。

5.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所述步骤(6)加入的细胞松弛素B具体配制方法为：将细胞松弛素B溶于二甲基亚砜，配制成0.5mg/mL的溶液，然后加入到受精卵溶液中，至体积比1:1000。

6.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所述步骤(6)中的观察具体为，取受精卵悬浮液1滴滴于载玻片上，轻弹载玻片使极体转至卵球侧面，然后进行观察。

7.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所述步骤(7)中的孵化密度为10-30粒/mL。

8.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所述步骤(7)中发育至担轮幼虫或D形幼虫是通过流式细胞术测定。

9.根据权利要求1所述的适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法，其特征在于：所有所述的砂滤海水的温度为23-26℃，盐度为20-30。