[发明专利]一株核桃基腐病的拮抗细菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株拮抗菌菌株，特别涉及一株拮抗核桃基腐病病原菌的枯草芽孢杆菌及其应用。

背景技术

核桃(Juglans regia L.)属落叶乔木，是我国重要的经济树种，具有丰富的营养价值和保健功能，可制取食用油和制作各种食品。核桃作为新疆的第二大果树，栽培面积占全疆林果总面积的四分之一，核桃产业已成为新疆农民致富增收的重要支柱产业之一。核桃适生范围广，常被栽植于山区和田园，是重要的用材树种和生态树种。近几年，随着新疆核桃种植面积逐渐扩大，大面积种植单一品种、管理粗放以及栽培模式等原因，病虫害问题日益增多，核桃基腐病(Pythium oligandrum Drechsler)的大面积严重发生制约了新疆核桃产业的健康发展。

目前，防治核桃基腐病的方法主要以化学方法为主，通过大田试验筛选出了咪酰胺等防效较好的药剂。常规的化学药剂在防治核桃基腐病方面，有经济、高效和方便等优势，但其易环境污染，不利于打造生态健康果园。最近几年通过生防菌株防治果树病害已成为一种重要的防治手段，目前应用较多的拮抗细菌主要有芽孢杆菌Bacillus subtilis、假单胞杆菌Pseudomonas spp.、土壤放射杆菌Agrobacterium radiobacter等。然而通过拮抗菌株防治核桃基腐病的研究尚未见报道。因此，筛选出抗菌谱广、生防活性高及对环境安全的新型拮抗细菌，制备成高效的生防菌剂，对该病害的防治具有重要意义。本研究将从分离核桃基腐病病原菌过程中得到的细菌与病原菌通过平板对峙培养法筛选出抑制效果较好的生防细菌，并对其进行种类鉴定，为生防菌株的进一步开发利用奠定基础。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的问题，提供一种防治核桃基腐病的拮抗菌菌株。

本发明进一步提供含有上述菌株作为有效菌，可作为生物防治菌剂对核桃基腐病进行防治。

本发明进一步提供利用上述生物防治菌剂的防治方法。

本发明人等从新疆和田地区墨玉县采集的核桃基腐病病害标本中分离出一株枯草芽孢杆菌株，发现该菌株对植物生长无不良影响，具有抑制核桃基腐病病原菌的效果，并由此完成了本发明。

本发明涉及以下的菌株和核桃基腐病生物防治剂，以及核桃基腐病防治方法。

(1)枯草芽孢杆菌菌株GY-11。

(2)核桃基腐病生防剂，其特征在于含有芽孢杆菌菌株GY-11作为有效菌。

(3)核桃基腐病防治方法，其特征在于使用上述(2)中记载的核桃基腐病生防剂。

[枯草芽孢杆菌菌株GY-11的分离与保藏]

本发明的枯草芽孢杆菌菌株GY-11是从新疆和田地区墨玉县采集的核桃基腐病病害标本中分离出的菌株。

具体的，本发明是通过以下步骤得到核桃基腐病拮抗菌菌株GY-11的：

拮抗菌株的分离：将核桃基腐病病害标本材料的病健交界部位切成5mm的组织块，先用75％乙醇消毒该组织块30s，立即取出，再置于1％次氯酸钠消毒90s，最后用无菌水冲洗3次后，利用灭菌滤纸将组织块表面的水吸干，得到消毒后的组织块。将消毒后的组织块在PDA培养基上进行培养，28℃恒温培养，每24h观察一次，使用划线法将长出的细菌菌落纯化在NA平板上，得到单菌落，最后将得到的单菌落于4℃保存。

拮抗菌株的筛选：将分离得到的单菌落进行活化培养，在距离病原菌2.0cm处等距离地将所述单菌落划线至已接种核桃基腐病病原菌的PDA平板上，以只接病原菌的PDA平板培养基为对照，每个处理3个重复。28℃恒温培养，待对照的平板培养基的菌丝即将长满时，测量细菌菌株与病原菌之间的抑菌带宽度，选取得到对核桃基腐病病菌抑菌带最宽的拮抗菌株GY-11。

其中，所述PDA培养基的配方是去皮土豆200g，葡萄糖17g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH自然。

其中，所述NA培养基的配方为：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.2。

该菌株根据其后所述的培养特征和生理生化特征，参考《常见细菌系统鉴定手册》和《芽孢杆菌属》的描述，结合分子生物学结果确定拮抗菌株GY-11为枯草芽孢杆菌，于2015年5月14日作为“枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GY-11”保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

(a)形态学性质

形态：杆状