[发明专利]一种循环肿瘤细胞的染色试剂盒

说明书

本发明公开了一种循环肿瘤细胞的染色试剂盒，包括固定液、免疫磁性微球和染色试剂，还包括封闭液，封闭液含有离子去污剂和蛋白保护剂，免疫磁性微球的表面被有抗EpCAM和Her2的联合抗体，染色试剂为含FITC‑CK19或FITC‑ Her2、Cy3‑CD45和DAPI的复合荧光染色试剂。这样循环肿瘤细胞的染色试剂盒具有血液白细胞干扰少，CTC细胞特有富集、捕获，循环肿瘤细胞染色效果好的优点。

技术领域

本发明涉及细胞染色，具体涉及一种循环肿瘤细胞的染色试剂盒。

背景技术

循环肿瘤细胞（CTC）是指进入人体外周血的肿瘤细胞。具有高度活力和高度转移潜能的循环肿瘤细胞可以在血液循环系统中存活，并在合适的环境中增值，导致肿瘤的复发和转移。循环肿瘤细胞的检测可有效地应用于体外早期诊断，化疗药物的快速评估，个体化治疗包括临床筛药、耐药性的检测，肿瘤复发的监测以及肿瘤新药物的开发等。循环肿瘤细胞检测包括血液处理、细胞捕获、细胞染色和循环肿瘤细胞定性、定量检测。公开号为CN102980793，就公开了一种循环肿瘤细胞染色试剂盒，该染色试剂盒包括固定液（多聚甲醛+牛血清白蛋白）、等渗液（氯化钠溶液或葡萄糖溶液）、伊红染液、美蓝+天青染液，伊红染液可以与碱性胞浆结合染色，美蓝+天青可以与细胞核结合染色，达到双重染色的效果，但该染色试剂盒需要对循环肿瘤细胞分离后才能染色，检测过程细胞分离步骤复杂，检测效率不高。公开号为CN 103472227，则公开了一种循环肿瘤细胞检测试剂盒，该试剂盒包括免疫磁性微球、磁分选装置（磁力架）和分析计数装置；试剂盒应用包含循环肿瘤细胞的计数、定量、及分子和基因水平的分析，但是该试剂盒中免疫磁性微球的抗体富集及捕获CTC细胞时，同时血液白细胞也有富集及捕获，因此无法排除血液白细胞的干扰，分析出的假阳性率较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种血液白细胞干扰少，CTC细胞特有富集、捕获，循环肿瘤细胞染色效果好的染色试剂盒。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种循环肿瘤细胞的染色试剂盒，包括固定液、免疫磁性微球和染色试剂，其特征在于还包括封闭液，所述封闭液为含有质量百分浓度为0.1%～1%离子去污剂、质量百分浓度为0.5%～3%蛋白保护剂的溶液，所述免疫磁性微球的表面被有抗EpCAM和人类表皮生长因子受体(Her2)的联合抗体，所述染色试剂为含有：FITC标记的抗细胞角蛋白19（CK19）或人类表皮生长因子受体2（Her2），Cy3标记的抗白细胞共同抗原CD45，DAPI的复合荧光染色试剂。

还包括抗荧光淬灭剂：含有质量百分浓度为0.1%～1%p-苯二胺的甘油溶液。

所述离子去污剂为高碳醇、脂肪酸、高碳脂肪胺、脂肪酰胺、环氧乙烷或聚乙二醇；所述蛋白保护剂为甘油或多糖。封闭液可以屏蔽非特异性的免疫荧光染色。

与现有技术相比，本发明的优点在于一种循环肿瘤细胞的染色试剂盒，包括固定液、免疫磁性微球和染色试剂，还包括封闭液，封闭液含有离子去污剂和蛋白保护剂，免疫磁性微球的表面被有抗EpCAM和Her2的联合抗体，染色试剂为含：FITC-CK19或FITC- Her2，Cy3-CD45，DAPI的复合荧光染色试剂。抗EpCAM和Her2的联合抗体特有富集、捕获CTC细胞，血液白细胞基本屏蔽捕获，因此排除白细胞干扰，CK19或HER2染色试剂特异识别腺癌含乳腺癌，结直肠癌，前列腺癌CTC，CD45为白细胞的通用标志物，可充分区别CTC与白细胞，DAPI能够与DNA强力结合的荧光染料，封闭液可以屏蔽非特异性的免疫荧光染色，这样循环肿瘤细胞的染色试剂盒具有血液白细胞干扰少，CTC细胞特有富集、捕获，循环肿瘤细胞染色效果好的优点。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1