[发明专利]一种煅烧骨靶向结合多肽及其合成方法与应用

说明书

本发明公开了属于生物医学技术领域的一种煅烧骨靶向结合多肽及其合成方法与应用。其具有序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸残基序列。本发明的煅烧骨靶向结合多肽，能够有效的将BMP‑2活性多肽控制在骨组织局部，避免与其它组织细胞亲附结合，靶向促进骨细胞的生成，特别适用于骨质疏松症的治疗。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种煅烧骨靶向结合多肽及其合成方法与应用。

背景技术

目前，通过对BMP作用机制的研究，选择其中发挥作用的活性序列进行体外合成，并设计了具有靶向结合矿物质支架的活性区域，获得了能够与煅烧牛骨支架稳定结合、缓释的BMP-2功能多肽，合成成本低于BMP-2市场价格的1％。在与BMP-2蛋白的活性对比实验中，BMP-2功能多肽对于成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶活性等关键指标的促进作用均优于BMP-2蛋白。目前正在进行动物体内实验评价，1-2个月内将获得主要结果。该功能多肽在骨质疏松症的治疗中也具有潜在的应用前景。

目前的BMP-2存在的重要问题是不能与支架材料稳定复合，体内释放流失快，因此产品制作中需加大用量，增加了异位成骨和炎症等副作用风险，且成本高。美国BMP-2产品采用的真核表达系统费用昂贵，活性较好。国内的原核表达系统成本较低，活性差。

之前有人将与胶原结合的基团修饰BMP，获得与骨的结合能力，然而胶原是体内多种组织所共有的成分，例如肌腱的胶原成分与骨组织完全一致，肌肉筋膜中也含有丰富的这种胶原，另外血管和皮肤甚至软骨、半月板各种纤维等组织内均含有胶原成分。因此其安全性仍然是一个未决的问题。

如何有效的将BMP控制在骨组织局部，避免与其它组织细胞亲附结合，成为一个重要的课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种煅烧骨靶向结合多肽及其合成方法与应用。

一种煅烧骨靶向结合多肽，是下述氨基酸残基序列之一的多肽：

1)序列表SEQ ID NO：1(KIPKASSVPTELSAISTLYLEPRREVAEL)，所示的氨基酸残基序列；

2)将序列表SEQ ID NO：1(KIPKASSVPTELSAISTLYLEPRREVAEL)所示的氨基酸残基序列经过1至3个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有煅烧骨靶向结合功能的多肽。

进一步的，本发明还提供了编码上述煅烧骨靶向结合多肽的基因，用于采用基因工程的方法来生产上述多肽，并采取基因工程中常用的纯化方法将其纯化。

上述煅烧骨靶向结合多肽的合成方法，按照如下步骤进行：

(1)以Rink Amide树脂或者Fmoc-Gly-WANG树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，采用缩合剂进行接肽反应，逐个接上氨基酸，最后一个肽链使用保护的巯基丙酸，得到保护树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽；

(2)加入切肽试剂进行切肽；

(3)以乙醚为溶剂，沉淀并收集促进骨生成的多肽粗品；

(4)将骨生成的多肽粗品溶于水中，用氨水调节pH到7.5-10.0，收集促进骨生成的多肽；

(5)将步骤(4)收集的促进骨生成的多肽通过HPLC分离纯化，获得目标产物。

所述缩合剂为HBTU/HOBt，TBTU/HOBt，BOP/HOBt，TBTU/HOAt，HBTU/HOA或BOP/HOAt。

所述切肽试剂为TFA/EDT/HAc/TIS/EDT。

上述煅烧骨靶向结合多肽在制备促进骨合成的药物中的应用。