[发明专利]三种沃尔巴克氏体的荧光检测引物及其检测方法和检测试剂盒

权利要求书

1.一种三种沃尔巴克氏体的荧光检测引物，其特征在于，包括

(1)针对伊蚊A型沃尔巴克氏体：

wAlbAF：5’-CAGGGTTGATGTTGAAGGAG-3’；

wAlbAR：5’-GCACCAGCTTTTACTTGACC-3’；

探针A：5’-TATCTTCAATTGCTATATCGTAATAAACG-3’；

探针A两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；

(2)针对伊蚊B型沃尔巴克氏体：

wAlbBF：5’-AAAGGAACCGAAGTTCATGAT-3’；

wAlbBR：5’-TTGTTTAGTTGTGAGTAAAGTCCC-3’；

探针B：5’-CAACATTTGCTCCAACAACTGTTGC-3’；

探针B两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1；

(3)针对库蚊沃尔巴克氏体：

wPipF:5’-GTTTGTGCAGCTAATAG-3’；

wPipR:5’-GTCTGCAAGGCCTATTTCTACTG-3’；

探针C：5’-CTTTCAATTGAAAAGATTCGATCAAC-3’；

探针C两端分别结合有荧光发生基团Texas Red和荧光淬灭基团BHQ2。

2.一种非疾病的诊断和治疗目的的三种沃尔巴克氏体的检测方法，其特征在于，提取样品DNA，以该样品DNA为模板，以权利要求1所述的三种沃尔巴克氏体的荧光检测引物wAlbAF、wAlbAR、探针A、wAlbBF、wAlbBR、探针B、wPipF、wPipR和探针C进行荧光定量PCR扩增，扩增反应完成后，根据探针标记的荧光发生基团的荧光信号，读取并记录样品的PCR循环次数Ct，根据样品的Ct值，按照建立的判断标准，判断样品是否含有伊蚊A型、伊蚊B型和库蚊沃尔巴克氏体。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的进行荧光定量PCR扩增，其反应条件为：预变性50℃5分钟，95℃15分钟；扩增94℃15秒、55℃45秒，40个循环；55℃的时候收集荧光信号。

4.一种三种沃尔巴克氏体的检测试剂盒，包括荧光检测引物和PCR试剂，其特征在于，所述的荧光检测引物包括：

(1)针对伊蚊A型沃尔巴克氏体：

wAlbAF：5’-CAGGGTTGATGTTGAAGGAG-3’；

wAlbAR：5’-GCACCAGCTTTTACTTGACC-3’；

探针A：5’-TATCTTCAATTGCTATATCGTAATAAACG-3’；

探针A两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；

(2)针对伊蚊B型沃尔巴克氏体：

wAlbBF：5’-AAAGGAACCGAAGTTCATGAT-3’；

wAlbBR：5’-TTGTTTAGTTGTGAGTAAAGTCCC-3’；

探针B：5’-CAACATTTGCTCCAACAACTGTTGC-3’；

探针B两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1；

(3)针对库蚊沃尔巴克氏体：

wPipF:5’-GTTTGTGCAGCTAATAG-3’；

wPipR:5’-GTCTGCAAGGCCTATTTCTACTG-3’；

探针C：5’-CTTTCAATTGAAAAGATTCGATCAAC-3’；

探针C两端分别结合有荧光发生基团Texas Red和荧光淬灭基团BHQ2。