[发明专利]发酵大豆萃取物作为吲哚胺2，3双加氧酶抑制剂的应用

说明书

相关申请案交互参照

本申请主张于2014年6月13日申请的第62/011,856号美国临时专利申请案的优先权，这些全部在此完整并入当成参考。

技术领域

本发明关于发酵大豆萃取物作为吲哚胺2，3双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂的用途。

背景技术

吲哚胺2，3双加氧酶(IDO1或IDO)是一种含有含铁血红素单体蛋白，其催化必需氨基酸色胺酸(Tryp)的降解。IDO已经被视为是一种赋予有力的免疫调节效应的酵素，以调节体内的免疫反应，归因于其造成了必需氨基酸色胺酸的分解代谢的酵素活性。IDO调节的色胺酸分解代谢已经被证实藉由通过多种机转而对T细胞产生效应，包括降低的T细胞增生、增加的T细胞自戕以及调控T细胞(Tregulatorycells,Tregs)的诱发，其共同导致细胞免疫反应的损害[1-4]。

发明内容

本发明非可预期的发现，发酵大豆萃取物有效于抑制吲哚胺2，3双加氧酶的活性，因而可作为IDO抑制剂。

因此，本发明提供发酵大豆萃取物作为IDO抑制剂的应用。

具体而言，所述的发酵大豆萃取物是通过以至少一种乳酸菌(例如，乳杆菌属(LactobaciIIusspecies)和可视需要的至少一种酵母菌(例如，酵母菌属(Saccharomycesspecies))使水溶性大豆萃取物发酵来制得。

在部分具体实施例中，发酵后进行一或多个选自由以下组成的群组的步骤:灭菌、过滤、浓缩、冻干及其任何组合。

在特定具体实施例中，该发酵大豆萃取物是通过包含以下步骤的过程来制得:(a)以至少一种乳酸菌伴随至少一种酵母菌使水溶性大豆萃取物发酵，以形成发酵液；(b)对该发酵液进行灭菌；(c)过滤经灭菌发酵液；和(d)从经过滤发酵液移除水，以形成浓缩的发酵大豆萃取物。

本发明的各个具体实例的细节说明如后。本发明的其它特征将会经由以下各个具体实例中的详细说明及权利要求书而清楚呈现。

附图说明

出于阐释本发明的目的，在图式中显示当前较佳的实施例。然而，应理解，本发明并不限于所显示的较佳实施例。在图式中：

图1中显示MS-20(本发明的发酵大豆萃取物)在人类周边血单核细胞(PBMCs)抑制干扰素伽玛(IFNγ)诱发的IDO活性。结果来自于n＝6单独实验，数据以平均±标准偏差的方式呈现，其中(a)显示色氨酸浓度降低(μM,Tryp)，(b)犬尿氨酸(kynurenine)浓度增加(μM,kyn)，以及(c)Kyn/Tryp比例(μmol/mmol)。

图2中显示MS-20以剂量依赖方式在人类周边血单核细胞(PBMCs)抑制IFNγ诱发的IDO活性，其中(a)为色氨酸浓度(Tryp)，(b)犬尿氨酸浓度(Kyn)，以及(c)为Kyn/Tryp比例(*10³)。这些结果显示MS-20以剂量依赖方式抑制IDO活性，EC₅₀经计算分别为0.71、0.46或0.48％(1％MS-20＝4mg/mL)。

图3中显示MS-20以剂量依赖方式抑制IFNγ诱发的海拉(HeLa)人类子宫颈癌细胞IDO活性，其中(a)为犬尿氨酸浓度(μM,Kyn)及(b)抑制百分比(％)。这些结果以平均±标准偏差表示(n＝3独立实验)。

图4显示人类周边血单核细胞(PBMCs)的存活率。以0.125％-1％(0.5-4mg/mL)的MS-20处理人类PBMCs达2天。以MTT分析测定细胞存活率。结果显示细胞存活率以MS-20剂量依赖的方式增加。这些结果来自于2次独立实验的平均值。

图5中显示海拉人类子宫颈癌细胞的存活率。以不同浓度的(a)MS-20或(b)L-1MT处理海拉人类子宫颈癌细胞达2天。结果显示细胞存活率随着MS-20的浓度增加而降低。这些结果以平均±标准偏差表示(n＝3独立实验)。

图6显示MS-20以剂量依赖方式抑制IDO酵素活性。数据以抑制百分比(％)表示。这些结果以平均±标准偏差表示(n＝2独立实验)。

具体实施方式

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域技术人员一般所了解相同的含义。如此处所使用者，以下用语具有归因于该等用语的意义，除非另有限定。

在本文中，冠词“一”是指一个或一个以上(亦即，至少一个)该冠词语法上之受词。举例而言，一组件是指一个组件或多于一个的组件。