[发明专利]抗人PCSK9抗体的制备及其用途

说明书

本发明公开了一种抗人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)嵌合抗体及其制备和用途。本发明从鼠杂交瘤细胞中分别扩增鼠轻链和重链可变区基因，并分别与人IgG的轻链和重链恒定区基因嵌合，通过重组表达获得人鼠嵌合抗体。本发明所述人鼠嵌合抗体与人PCSK9具有良好的亲和性，且明显抑制PCSK9对肝细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)的降解活性，提高肝细胞对LDL‑胆固醇(LDL‑C)的摄取，降低血液胆固醇水平。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种新型抗人PCSK9抗体的制备及其用途。

背景技术

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是kexin样前蛋白转化酶枯草溶菌素家族的第9个成员，由692个氨基酸组成。PCSK9主要来源于肝、肾和小肠。PCSK9的合成发生在内质网，后经内质网转运至高尔基体，并在高尔基体中经一系列修饰后分泌入血。目前认为，只有肝脏分泌的PCSK9可以分泌入血，并与肝细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDLR)结合，介导LDLR降解，调节血浆胆固醇水平。作为低密度脂蛋白受体(LDL-R)的负调节剂，过量PCSK9与肝细胞表面LDL-R结合后可加速其降解，导致肝细胞对LDL-胆固醇(LDL-C)的摄取下降，进而增加循环的LDL-C水平，最终使血液中胆固醇水平升高。因此，PCSK9已经成为治疗高胆固醇血症的重要靶点。

高胆固醇血症分为家族性和非家族性，但均属于脂质代谢疾病，是冠状动脉疾病发生的重要危险因素。他汀类药物目前是治疗高胆固醇血症最为成功的药物，但一些不能耐受他汀类药物以及LDL水平过高的患者，其脂质水平始终不能达到预期目标。因此，还需要开发新型降脂药物单独或协同他汀类药物治疗高胆固醇血症。抗PCSK9已经成为降低血液高胆固醇水平的一种新型治疗手段。至今，国外已发展多个治疗性单克隆抗体，且均在临床试验中显示良好的疗效，如赛诺菲与Regeneron联手开发的alirocumab，安进公司同类产品evolocumab，均显著降低健康受试者、家族性高脂血症患者和非家族性高胆固醇血症患者的LDL-C水平；对于他汀类药物效果不佳的患者，在注射单克隆抗体后其血液LDL-C水平也降低40％-72％。预计PCSK9单克隆抗体治疗药物将在2015-2017年先后获得美国FDA批准上市，这将开辟治疗高胆固醇血症的新里程碑。

本发明提供了一种抗PCSK9的嵌合抗体，该嵌合抗体能特异性地结合人PCSK9，从而有效抑制PCSK9活性，最终发挥降低血浆胆固醇的作用。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种抗PCSK9的重组嵌合抗体及其及其编码基因。其具体序列如下：

轻链可变区氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：1所述；

重链可变区氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：3所述；

轻链恒定区氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：5所述；

IgG1重链恒定区的氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：9所述；

IgG4重链恒定区的氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：7所述；

编码所述上述融合蛋白核苷酸序列如下：

轻链可变区核苷酸如序列表中的SEQ ID NO：2所述；

重链可变区核苷酸如序列表中的SEQ ID NO：4所述；

轻链恒定区核苷酸如序列表中的SEQ ID NO：6所述；

IgG1重链恒定区核苷酸如序列表中的SEQ ID NO：10所述；

IgG4重链恒定区核苷酸如序列表中的SEQ ID NO：8所述；

本发明的目的之三在于提供嵌合抗体的制备方法

1)从阳性杂交瘤细胞中克隆人PCSK9抗体基因；