[发明专利]藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法及测定方法

权利要求书

1.一种藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)白桦脂酸的提取：取藕节，粉碎过40目筛，加入藕节粗粉重量40～50倍体积量的乙醇，50Hz～100Hz的超声频率，超声提取1～3次，每次100min，得到白桦脂酸；

(2)多糖的提取：取步骤(1)提取白桦脂酸后的藕节滤渣，依次用无水乙醇、乙酸乙酯洗涤，挥干乙醇和乙酸乙酯，加入藕节滤渣重量40～50倍量体积的水，然后在95℃～100℃温度加热回流提取1～3次，每次125min，提取得到多糖。

2.根据权利要求1所述的利用响应曲面法优化的藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，其特征在于，步骤(1)中加入藕节粗粉重量49倍量体积的乙醇，乙醇体积浓度为95％。

3.根据权利要求1所述的利用响应曲面法优化的藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，其特征在于，步骤(2)中加入藕节滤渣重量50倍量体积的水，然后在95℃温度加热回流提取1～3次，每次125min。

4.藕节中白桦脂酸和多糖的测定方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)白桦脂酸样品与多糖的溶液制备

白桦脂酸的提取：取藕节，粉碎过40目筛，加入藕节粗粉重量40～50倍体积量的乙醇，50Hz～100Hz的超声频率，超声提取1～3次，每次100min，提取液抽滤后进行8000r/min离心10min，过0.44μm滤膜，得到白桦脂酸待测液；

多糖的提取：取步骤(1)提取白桦脂酸后的藕节滤渣，依次用无水乙醇、乙酸乙酯洗涤，挥干乙醇和乙酸乙酯，加入藕节滤渣重量40～50倍量体积的水，然后在95℃～100℃温度加热回流提取1～3次，每次125min，提取得到多糖，8000r/min离心10min，精密量取上清液进行酸性、中性多糖测定；

(2)白桦脂酸及多糖标准品的配置和标准曲线的建立

①标准品溶液制备

白桦脂酸对照品溶液的制备：精密称取白桦脂酸3.12mg，置5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得到624μg/mL浓度白桦脂酸的对照品溶液；

葡萄糖对照品溶液制备：精密称取12.61mg葡萄糖于100mL容量瓶内，用蒸馏水定容至100mL，得到0.1261mg/mL浓度的葡萄糖溶液；

葡萄糖醛酸对照品溶液制备：精密称取11.22mg葡糖糖醛酸置于100mL容量瓶内，用蒸馏水定容至100mL，得到0.1122mg/mL浓度的葡糖糖醛酸溶液；

②白桦脂酸测定色谱条件及多糖测定方法

取规格为150mm×4.6mm，5μm的Apollo C18色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.2％磷酸水溶液，A相和B相体积比为80：20等度洗脱，流速：1mL/min，检测波长：207nm，柱温：30℃，进样体积：20μL；

精密量取多糖提取液补足至1mL，加入5％的苯酚2mL摇匀，再加入浓硫酸7mL摇匀，置沸水浴20min，用紫外分光度计在490nm波长下测定；

精密量取多糖提取液补足至1mL，加入12.5mmol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，沸水浴加热10min，加入0.125％咔唑0.2mL，再沸水浴15min，用紫外分光光度计在512nm波长下测定；

③标准曲线建立

取系列浓度的白桦脂酸，葡萄糖对照品和葡萄糖醛酸对照品按上述②方法测定，建立白桦脂酸，葡萄糖醛酸及葡萄糖的标准曲线，如下表：

葡糖糖、葡萄糖醛酸及白桦脂酸标准曲线

(3)测定藕节白桦脂酸及多糖含量

取步骤(1)制备得到的白桦脂酸样品与多糖的溶液，按以上步骤(2)方法和白桦脂酸，葡萄糖醛酸及葡萄糖的标准曲线测定白桦脂酸样品与多糖的溶液中白桦脂酸，葡萄糖醛酸及葡糖糖的含量。

5.根据权利要求4所述的藕节中白桦脂酸和多糖的测定方法，其特征在于步骤(1)中加入藕节粗粉重量49倍量体积的乙醇，乙醇体积浓度为95％。

6.根据权利要求4所述的藕节中白桦脂酸和多糖的测定方法，其特征在于步骤(1)中加入藕节滤渣重量50倍量体积的水，然后在95℃温度加热回流提取1～3次，每次125min。