[发明专利]一种长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1重组蛋白及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1重组蛋白及其制备和应用。

背景技术

固有免疫系统(innate immunity)是免疫系统的重要组成部分，是宿主抵御病原入侵的第一道防线。无脊椎动物缺乏适应性免疫系统(adaptive immunity)，因此仅能依靠固有免疫抵御病原入侵。固有免疫主要通过抗菌肽/蛋白和吞噬作用杀伤并清除病原物，因此，对病原物的识别是诱发免疫反应的关键步骤。病原入侵宿主过程中，伴随其感染和复制，会产生一系列保守组分，称为病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)，这些PAMPs能够被宿主免疫细胞表面的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)有效识别，进而诱导一系列的免疫级联反应。目前，无脊椎动物中已发现了十余类识别受体，如肽聚糖识别蛋白(PGRP)和Toll样受体等，它们通过结合不同的病原相关分子模式完成对各种病原微生物的识别，在诱导细胞因子和炎症的产生、抗菌肽的表达、激活酚氧化酶级联反应和吞噬作用等一系列固有免疫应答中发挥重要作用。因此，对模式识别受体的鉴定和功能研究一直是免疫学研究的热点。

补体系统是固有免疫的重要组成部分，具有调理吞噬、介导炎症、溶解细胞和调节免疫应答等生物学功能。补体分子C1q(Complement 1q)是补体系统经典途径的重要识别分子，能够启动经典途径，并且在固有免疫和适应性免疫之间发挥重要的桥梁作用。现已在无脊椎动物中发现众多包含C1q球状结构域的补体样分子C1qDC蛋白(C1q domain-containing protein)，该类蛋白在无脊椎动物免疫防御和病原清除等方面发挥关键作用。因此，对补体样分子的发掘和利用有助于我们明确牡蛎免疫系统识别病原物的机制，揭示牡蛎免疫系统诱发和清除病原物的规律，最终为牡蛎病害防治、药物研发和良种选育提供理论基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1重组蛋白及其制备和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1重组蛋白，CgC1qDC-1基因重组蛋白为序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示。

一种长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1重组蛋白的制备，

(1)以长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1编码区为模板，采用P1和P2引物进行PCR扩增，待用；

(2)PCR扩增产物与将pEASY-E1载体通过T4连接酶连接，转化，测序鉴定重组子；

(3)将上述构建载体转入Transetta(DE3)表达菌株中进行诱导培养，而后纯化、复性，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白CgC1qDC-1；

所述引物P1和P2分别为P1：5’-ATGTCCCAAAATGTTTTGATC-3’；P2：5’-GGCCAGTTTGAATCCAGAG-3’。

一种长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1重组蛋白的应用，所述序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的CgC1qDC-1重组蛋白用于制备病原菌识别或促吞噬活性的制剂。

本发明所具有优点：

本发明中的长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1为包含C1q球状结构域的补体样分子C1qDC蛋白，其重组蛋白对革兰氏阴性菌的病原相关分子模式脂多糖具有较高的结合活性；同时，该蛋白能够增强长牡蛎血淋巴细胞对革兰氏阴性菌的吞噬能力。本发明的对长牡蛎补体样分子CgC1qDC蛋白的研究，有利于深入揭示长牡蛎固有免疫作用机制，充分挖掘和利用海洋来源基因资源，在开发抗菌类药物和新型免疫增强剂、饲料添加剂等方面具有潜在应用价值，同时为海洋经济养殖动物的病害防治提供重要物质基础和理论支持。

附图说明

图1为本发明实施例提供的长牡蛎补体样分子CgC1qDC-1基因重组蛋白对革兰氏阴性菌病原相关分子模式脂多糖具有较强结合活性图。其中，如图A所示，拉下实验(pull down)表明，CgC1qDC-1对LPS具有较高的结合特异性；图B所示，酶联免疫吸附实验(ELISA)表明，CgC1qDC-1对LPS结合能力较强，解离常数Kd值为0.09×10^-6M。