[发明专利]融合蛋白SUMO3-PLA2及制备方法和医用用途

权利要求书

1.一种融合蛋白SUMO3-PLA2，其特征在于：其的氨基酸序列如SEQno.1所示。

2.权利要求1所述的融合蛋白SUMO3-PLA2的制备方法，包括以下步骤：

1）鸡SUMO3基因的获取

提取鸡全基因组；PCR法扩增SUMO3基因序列；所用引物为：

上游引物：

CATATGATGTCGGACCAGGAAGCAAAG

下游引物：

ACCGGTCTGTTCCTGATAAACTTC

以鸡全基因组为模板，上述两条引物，PCR方法得到鸡SUMO3基因；

2）鼠源性PLA2_-基因的获取

提取小鼠基因组；PCR法扩增PLA2基因序列；所用引物为：

上游引物：

ACCGGTGGAGGACTCCTGGAGCT

下游引物：

CTCGAGTCAATTGCACTTGGGAGAGTC

以小鼠全基因组为模板，上述两条引物，PCR方法得到PLA2基因序列；

3）SUMO3-PLA2融合蛋白基因全长的构建

SUMO3基因PCR扩增后产物经双酶切（NdeI和AgeI）和PLA2基因PCR扩增产物经双酶切 （AgeI和XhoI）后，凝胶回收双酶切产物；pColdTF表达质粒双酶切（NdeI和XhoI）后，凝胶回 收大片段；

将上述三个回收片段连接，获得将融合蛋白全长基因构建入pColdTF表达载体中的重 组质粒，既融合蛋白原核表达质粒pColdTF-SUMO3-PLA2；其中NdeI和XhoI两酶切位点之间 一段基因序列即为融合蛋白基因SUMO3-PLA2；

4)TF-SUMO3-PLA2融合蛋白的制备

将融合蛋白原核表达质粒TF-SUMO3-PLA2导入到BL21（DE3）原核表达菌体系，37℃终 浓度0.1mMIPTG诱导表达载体蛋白；非变性条件下，Ni亲和层析一步法纯化融合蛋白。

3.权利要求1中的融合蛋白作为去SUMO酶底物的用途，可以作为一种底物用来作人、哺 乳动物及鸟类去SUMO3化酶类的活性分析检测试剂盒。