[发明专利]一种野生灵芝的育种方法

权利要求书

1.一种野生灵芝的育种方法，其特征在于，包括如下工艺步骤：

(1)野生灵芝采集：采集在海拔800～1900m高山生长的野生灵芝；

(2)配制试管斜面培养基：

①配制母种培养基；

②制作试管斜面培养基：将步骤①所得母种培养基分装于试管中，高压灭菌30～50分钟，制成试管斜面培养基后，冷却；

(3)组织分离：取步骤(1)所得野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒并洗净后吸干水分，将菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成3～5mm的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于步骤(2)②得到的试管斜面培养基上，培养，上述操作均在无菌条件下进行，即得组织分离的母种；

(4)菌种接种和培养：将步骤(3)所得组织分离的母种，在无菌状态下，接种于步骤(2)②得到的的试管斜面培养基上，继续培养，待试管上长满菌丝，即得二次母种，并于5～6℃保存；将二次母种在无菌条件下，转移到另一支步骤(2)②得到的试管斜面培养基中，即得栽培母种；

(5)接种与培养：将步骤(4)所得栽培母种接种于原种培养基中，培养，即得原种；再将上述原种接种于栽培种培养基，培养，即得栽培种。

2.根据权利要求1所述的一种野生灵芝的育种方法，其特征在于，步骤(1)所述野生灵芝为紫芝，形状为盖圆形或偏半圆形、直径为25～35cm、柄长为8～15cm、颜色为紫黑色。

3.根据权利要求1所述的一种野生灵芝的育种方法，其特征在于，步骤(2)所述母种培养基为以下三种培养基中的一种或几种：

a、糯米培养基：取糯米100g、葡萄糖25g、琼脂20g、水1000mL，将糯米加水，文火煮20～30分钟，用2层纱布过滤，取汁液，然后将上述汁液补充到1000mL；

b、马铃薯培养基：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL，马铃薯切片，加水1000mL，文水煮沸15～20分钟，4层纱布过滤，取汁液，然后将上述汁液补充到1000mL；

c、综合培养基：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B₁10mg、琼脂20g。

4.根据权利要求1所述的一种野生灵芝的育种方法，其特征在于，步骤(3)所述子实体的性状为出菇早、正常、健壮、朵形大、未成熟，所述消毒并洗净后吸干水分的具体方法为用体积分数为75％的酒精消毒，然后用无菌水冲洗，用无菌纱布吸干水分，所述培养的温度为25～30℃、环境为黑暗、培养的时间为10～15天。

5.根据权利要求1所述的一种野生灵芝的育种方法，其特征在于，步骤(4)所述继续培养的温度25～30℃、环境为黑暗、培养的时间为10～15天。

6.根据权利要求1所述的一种野生灵芝的育种方法，其特征在于，步骤(5)中原种培养基包括质量百分数为70％的玉米粒、24％的木屑、5％的麦麸、1％的石膏，其制作方法为：取质量百分数为24％的木屑，先预湿，取质量百分数为70％的玉米粒，用质量百分数为0.3％的多菌灵浸泡15～20小时，用清水过滤一次，再取质量百分数为5％的麦麸、1％的石膏，然后将上述木屑、玉米粒、麦麸、石膏拌匀后装袋，即得原种培养基菌袋，在≤10h内，置于灭菌锅中，升温至100℃，开始计时，灭菌20～25小时，然后待上述原种培养基菌袋完全冷却后，移至接种箱，将接种箱密封，消毒1～2小时后，备用。