[发明专利]温度敏感型载体pBBR1MCS‑2‑Ts1及其应用有效
| 申请号： | 201510340926.X | 申请日： | 2015-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN104894153B | 公开（公告）日： | 2017-11-03 |
| 发明（设计）人： | 黄建忠;江贤章;周芬;刘洪娇;祁峰;张明亮;陶勇 | 申请（专利权）人： | 福建师范大学;中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N1/21;C12N1/13;C12N1/19;C12N1/15 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司11245 | 代理人： | 关畅,任凤华 |
| 地址： | 350117 福建省福州*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 温度 敏感 载体 pbbr1mcs ts1 及其 应用 | ||
1.构建重组载体的方法，是将SEQ ID No.1的第1557-2526位所示的DNA片段替换为目的基因表达盒，并保持SEQ ID No.1的其他核苷酸不变，得到的重组DNA即为所述重组载体；
所述目的基因表达盒编码的蛋白质为将SEQ ID No.2所示的蛋白质进行A1）的改造、保持SEQ ID No.2的其它氨基酸残基均不变得到的蛋白质：所述A1）为如下A11）和A12）和A13）：
A11）将SEQ ID No.2第12位的Ala突变为Thr；
A12）将SEQ ID No.2第81位的Asp突变为His；
A13）将SEQ ID No.2第140位的His突变为Leu。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述目的基因表达盒中的目的基因为将SEQ ID No.1的第1794-2456位核苷酸所示的DNA分子进行B1）的改造、保持SEQ ID No.1的第1794-2456位核苷酸所示的DNA分子中的其它核苷酸均不变得到的DNA分子：所述B1）为如下B11）和B12）和B13）和B14）：
B11）将SEQ ID No.1第1827位的G突变为A；
B12）将SEQ ID No.1第2034位的G突变为C；
B13）将SEQ ID No.1第2212位的A突变为T；
B14）将SEQ ID No.1第2249位的C突变为A。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述目的基因表达盒中启动所述目的基因表达的启动子为SEQ ID No.1的第1557-1793位所示的DNA分子；所述目的基因表达盒中终止所述目的基因表达的终止子为SEQ ID No.1的第2457-2526位所示的DNA分子。
4.由权利要求1-3中任一所述方法构建的重组载体。
5.含有权利要求4所述重组载体的重组微生物或重组细胞系。
6.一种蛋白质，其特征在于：所述蛋白质为将SEQ ID No.2所示的蛋白质进行A1）的改造、保持SEQ ID No.2的其它氨基酸残基均不变得到的蛋白质：所述A1）为如下A11）和A12）和A13）：
A11）将SEQ ID No.2第12位的Ala突变为Thr；
A12）将SEQ ID No.2第81位的Asp突变为His；
A13）将SEQ ID No.2第140位的His突变为Leu。
7.一种DNA分子，其特征在于：所述DNA分子为将SEQ ID No.1的第1794-2456位核苷酸所示的DNA分子进行B1）的改造、保持SEQ ID No.1的第1794-2456位核苷酸所示的DNA分子中的其它核苷酸均不变得到的DNA分子：所述B1）为如下B11）和B12）和B13）和B14）：
B11）将SEQ ID No.1第1827位的G突变为A；
B12）将SEQ ID No.1第2034位的G突变为C；
B13）将SEQ ID No.1第2212位的A突变为T；
B14）将SEQ ID No.1第2249位的C突变为A。
8.权利要求7所述DNA分子在制备温度敏感载体中的应用。
9.权利要求4所述重组载体在作为温度敏感载体中的应用。
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