[发明专利]一种防止核酸等温扩增产物气溶胶污染的方法

说明书

本发明涉及一种防止核酸等温扩增产物气溶胶污染的方法。用PCR单管管夹将装有反应液的PCR单管固定，或用PCR八联管管夹将装有反应液的PCR八联管固定，将PCR单管管夹或PCR八联管管夹穿到水浴锅的管架上，下压管架，将装有反应液的PCR单管或PCR八联管浸没在水浴锅液面以下，在设定温度下进行核酸等温扩增，反应结束后通过指示剂颜色变化判断扩增结果。通过该方法进行核酸等温扩增，偶尔泄露的气体经过水洗将扩增产物溶解在水中，可防止核酸扩增产物引起的气溶胶污染。

技术领域

本发明涉及一种防止核酸等温扩增产物气溶胶污染的方法，属于生物技术领域。

背景技术

核酸等温扩增技术包括环介导等温扩增（LAMP）、核酸序列依赖性扩增（NASBA）、链替代扩增反应（SDA）、滚环扩增反应（RCA）和解链酶扩增（HAD）等，核酸等温扩增无温度变化的耗时，不需要昂贵的仪器，具有取代链式聚合酶反应（PCR）的趋势。但扩增产物的气溶胶污染仍然是核酸等温扩增技术推广应用的限制因素。目前常用扩增产物不开盖检测来减少气溶胶污染，例如杭州优思达生物技术有限公司开发了全封闭式靶核酸扩增物快速检测装置（专利号：ZL200610109620.4），博奥生物有限公司研发了恒温扩增微流控芯片，华峰生物科技有限公司采用HF反应管实现不开盖检测，现有检测方法要么显著增加了检测成本，要么还不能完全解决气溶胶污染问题。因此，便宜有效的防止核酸等温扩增产物气溶胶污染的方法对于核酸等温扩增技术的推广应用至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防止核酸等温扩增产物气溶胶污染的方法，这种方法可快速有效推动核酸等温扩增技术的推广应用，而不增加耗材成本。

一种防止核酸等温扩增产物气溶胶污染的方法，其特征在于，水下水浴恒温扩增核酸，偶尔泄露的气体经过水洗将扩增产物溶解在水中，防止核酸扩增产物引起的气溶胶污染。

上述方法通过以下配件实现：配件包括PCR单管管夹或PCR八联管管夹、固定PCR单管管夹或PCR八联管管夹的管架。

上述方法的操作步骤包括：用PCR单管管夹将装有反应液的PCR单管固定，或用PCR八联管管夹将装有反应液的PCR八联管固定，将PCR单管管夹或PCR八联管管夹穿到水浴锅的管架上，下压管架，将装有反应液的PCR单管或PCR八联管浸没在水浴锅液面以下，在设定温度下进行核酸等温扩增，反应结束后通过指示剂颜色变化判断扩增结果。

本发明的优点在于：在不增加检测耗材成本的情况下，可有效控制核酸等温扩增产物的气溶胶污染，快速推动核酸等温扩增技术的推广应用。

附图说明

图1：本发明的PCR单管管夹结构示意图。

具体实施方式

实施例1：沙门氏菌（Salmonella）特异性基因invA的水下LAMP扩增检测方法：

（1）反应体系（反应总体积为 25µl）

（2）扩增反应

用PCR单管管夹将装有反应液的PCR单管固定，或用PCR八联管管夹将装有反应液的PCR八联管固定，将PCR单管管夹或PCR八联管管夹穿到水浴锅的管架上，下压管架，将装有反应液的PCR单管或PCR八联管浸没在水浴锅液面以下，60℃ 恒温水浴50分钟，如反应液为浅黄色则为阴性；如反应液变为绿色则为阳性。

实施例2：布氏锥虫（Trypanosoma brucei gambiense）基因片段5.8S-ITS2的水下LAMP扩增检测方法：

（1）反应体系（反应总体积为 25µl )