[发明专利]一种坏死梭杆菌选择培养基

说明书

技术领域

本发明涉及检验微生物培养领域，具体涉及一种坏死梭杆菌选择培养基。

背景技术

微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体（如细胞或细菌等）而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。坏死梭杆菌（Fusobacterium necrophorum,Fn）为梭杆菌属、革兰氏染色阴性、严格厌氧的细菌。致病性Fn菌株产生多种独立因子，如白细胞毒素（leukotoxin,Lkt）、溶血素（hemolysin）、血凝素（hemagglutinin）和内毒素（endotoxin）等，能引发多重哺乳动物（包括人类）和禽类的坏死杆菌病（necrobacillosis）。坏死梭杆菌是各种化脓坏死性感染疾病的主要和次要病原，广泛存在于动物和人的口腔、呼吸道和胃肠道等天然腔道内，以及化脓性坏死病灶和梗死的组织器官内，属条件致病菌。Fn一般通过有创伤的皮肤或粘膜侵入机体，与其他细菌如大肠杆菌或金黄色葡萄球菌、化脓性棒状杆菌等化脓类细菌联合感染宿主引起坏死杆菌病，该病在动物中常见且危害严重，人类主要引起急性咽炎综合症（Lemierre′s）、手部皮肤、口腔和肺部脓肿。这些疾病典型的症状是存在脓肿或坏死性病灶，并有恶臭气味。此外，有的还伴随菌血症的发生对宿主生命安全造成严重威胁，临床症状与链球菌性咽炎、细菌性肺炎症状类似，易误诊。因此作为确诊唯一依据的临床细菌检查的正确与快速鉴定极为重要。

目前，坏死梭杆菌检验手段主要是采用以聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）为基础的分子生物学检测方法，该方法需要对样本进行DNA提取和PCR引物设计，且需要配备PCR相关仪器设备，成本昂贵，操作复杂，基层实验室难以实现。实验室常用CDC厌氧菌琼脂培养坏死梭杆菌，由于基层医院检验科大多缺乏无氧检验设备，因此大多用“厌氧缸培养法”，所谓的厌氧缸是普通的干燥缸，接种好标本的平板或液体培养基试管放入干燥缸内培养，通过物理化学的方法耗尽缸内氧气，造成厌氧环境。厌氧缸法的氧气耗尽需要时间，而坏死梭杆菌为专性厌氧杆菌，因此该种培养技术存在以下缺陷：①厌氧缸内CDC厌氧菌琼脂培养基上的坏死梭杆菌生长缓慢，阳性检出率低，一周左右方可较准确的作出鉴定；②由于非绝对无氧条件，因此咽喉分泌物标本内需氧菌和兼性厌氧菌具有生存条件，培养基分离能力差。

发明内容

本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于坏死梭杆菌生长的选择培养基。

本发明解决其技术问题的技术方案是：一种坏死梭杆菌选择培养基，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：

胰酪蛋白胨5.0～10.0g；

葡萄糖5.0～10.0g；

酵母粉5.0～10.0g；

氯化钠5.0g；

琼脂15.0～20.0g ；

牛胆盐0.5～1.0g；

乙二胺四乙酸二钾镁盐2～3g；

γ-氨基丁酸0.1～0.5g；

无菌热变形小牛血清50～100ml；

蒸馏水加至1000ml。

上述的无菌热变形小牛血清制备方法为：取无菌小牛血清80℃下加热10min，在45℃下加入灭菌胰蛋白酶酶解90min，酶与底物的质量比为1:150。

上述培养基的制备方法为：

称取胰酪蛋白胨；葡萄糖；酵母粉；氯化钠；琼脂；牛胆盐；乙二胺四乙酸二钾镁盐；γ-氨基丁酸溶于蒸馏水中，混匀，121℃，灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌热变形小牛血清混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。

优化方案中，每1000ml培养基还含有缬氨酸0.1～0.5g。

优化方案中，每1000ml培养基还含有L-高精氨酸0.01～0.05g。

优化方案中，每1000ml培养基还含有浓度200g/L的石菖蒲水煮液200～300ml。

上述优化方案的培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取石菖蒲加水煮沸30-60min，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得石菖蒲水煮液；