[发明专利]一种脆弱类杆菌选择培养基

说明书

技术领域

本发明涉及微生物检验领域，具体涉及一种脆弱类杆菌培养基。

背景技术

脆弱类杆菌（Bacterooides Fragilis，BF）为革兰阴性短杆菌有荚膜，无芽胞，部分有菌毛，专性厌氧。BF是人体正常菌群的组成部分，也是临床上重要的条件致病菌，可引起人体很多部位感染，感染症状遍及临床各科，检出率高，占临床厌氧菌分离株的25%、类杆菌分离株的50%，其中腹泻患者BF分离率达9.2%~26.8%。

BF的临床测定主要为PCR和细胞培养，PCR的敏感度高，5小时既可以获得结果，具有快速和敏感的特性，但是存在以下缺陷：①粪便标本中含有PCR抑制物，易造成假阴性结果；②需要复杂的实验条件，费用较高。而细胞培养是BF目前最可靠的检验方法，但BF的专性厌氧和苛养性质，导致其培养时间较长，在绝对无氧的情况下，使用2d开始有个别样本开始生长，7d无阳性菌落出现方能达到阴性检验标准。由于鉴定时间长，所以上述的检验很难指导临床治疗，延误时机。目前BF培养的使用的培养基多为胆汁七叶苷（BBE）琼脂，其成分含有胆汁，胆汁用以抑制对之敏感的厌氧菌，只有耐胆汁的脆弱类杆菌和可变梭杆菌、死亡梭杆菌不被抑制，从而起到选择性培养的目的。但是BBE培养基存在下述缺陷：①不能抑制可变梭杆菌、死亡梭杆菌的生长；②对于需氧菌和兼性厌氧菌的灭杀效果不了，因此要加入庆大霉素100mg/L，但庆大霉素对于BF同样产生微弱的抑制作业，导致其生长缓慢；③如果不加入庆大霉素，就需要严格的无氧环境，由于基层医院检验科大多缺乏绝对无氧检验设备，因此大多用“厌氧缸培养法”，所谓的厌氧缸即干燥缸，通过物理化学的方法耗尽缸内氧气，造成厌氧环境。厌氧缸法的氧气耗尽需要时间，影响了专性厌氧杆菌BF的生长和分离。

故寻找一种新的培养基，能够在“厌氧缸培养”的环境下快速检测，对于基层临床医院尤为重要。

发明内容

本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于粪便标本的脆弱类杆菌生长的选择培养基。

本发明解决其技术问题的技术方案是：一种脆弱类杆菌选择培养基，其特征在于，每升培养基中含有：胰酪蛋白胨10.0g；葡萄糖2.0g；酵母粉5.0g；氯化钠5.0g；琼脂15.0g；升麻甙3g；猪胆粉20g；缬氨酸0.1g；无菌小牛血清100ml；蒸馏水加至1000ml。

上述培养基的制备方法为：称取胰酪蛋白胨；葡萄糖；酵母粉；氯化钠；琼脂；升麻甙；猪胆粉；缬氨酸，用蒸馏水溶解、混匀，121℃下灭菌15min，冷却到45℃，加入无菌小牛血清混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。

本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、脆弱类杆菌分离率高的特点。

1、所述的胰酪蛋白胨含有多种糖类、氨基酸、维生素和微量元素为脆弱类杆菌生长提供能量，葡萄糖提供碳源，酵母粉富含蛋白质、氨基酸、多肽、核苷酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，促进脆弱类杆菌的繁殖和生长；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂为培养基的凝固剂；

2、缬氨酸为厌氧菌营养剂；L-高精氨酸为激活剂，促进缬氨酸的吸收；γ-氨基丁酸为营养增强剂，促进脆弱类杆菌生长。

3、猪胆粉和升麻甙（Cimicifugoside）的使用：猪胆粉中的胆汁成分用以抑制对之敏感的厌氧菌，而升麻甙用以分离脆弱类杆菌和可变梭杆菌、死亡梭杆菌，其分离作用在于可以选择性抑制厌氧梭杆菌属核苷透膜转运，作用途径为梭杆菌属细胞壁上的外膜蛋白OMP和fadA黏附蛋白，而由于脆弱类杆菌无上述特异性蛋白，因此升麻甙对于脆弱类杆菌无杀灭作用。基础实验证实：将脆弱类杆菌和可变梭杆菌、死亡梭杆菌菌株分别接种到含有3g/L升麻甙的胆汁琼脂培养基和普通胆汁琼脂培养基，于37℃厌氧培养7d，脆弱类杆菌阳性检出率100%，而可变梭杆菌、死亡梭杆菌菌株阳性检出率为0%。由此证实，升麻甙对于可变梭杆菌、死亡梭杆菌具有较好的灭菌作用，且对于脆弱类杆菌无明显影响。