[发明专利]一种体外培养睾丸组织诱导生成精子细胞的方法有效
| 申请号： | 201510347492.6 | 申请日： | 2015-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN104974982B | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 李向东;姚建飞 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小鼠睾丸 培养基 胶块 精子细胞 琼脂糖胶 组织培养 睾丸组织 种体 诱导 细胞培养箱 新鲜培养基 块状组织 细胞工程 圆形精子 组织样品 长形 精子 切块 制备 浸泡 分割 | ||
【权利要求书】：
1.一种体外培养睾丸组织诱导生成精子细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)培养胶块的制备：将1.2％的琼脂糖胶切块置于孔板中，加入培养基浸泡过夜后，吸掉旧培养基，加入新鲜培养基，此时的琼脂糖胶块用作培养胶块；
所述培养基的成分及含量为：90％MEMα+10％KSR；
(2)取新生10.5-12.5天的小鼠睾丸，去外层白膜，分割成块状组织样品；
(3)将组织样品置于前述的培养胶块上，将孔板置于细胞培养箱中进行培养；
(4)新生10.5-12.5天的小鼠睾丸组织培养27天得到长形精子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)将1.2％的琼脂糖胶切成大小为10×10×5mm的胶块，置于6孔板的孔中，加入培养基，使胶块浸泡在培养基中，浸泡过夜后，吸掉旧培养基，加入新鲜培养基，使培养基液面达到胶块高度的4/5处。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)将睾丸分割成1mm3大小的组织样品。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中每块胶块放置2-3块组织样品。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中将孔板置于34℃，5％CO2细胞培养箱中进行培养。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中每4.5天更换一次培养基。
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