[发明专利]产3-羟基丙酸均聚物/共聚物的重组菌及构建方法与应用有效

申请号：	201510349697.8	申请日：	2015-06-23
公开（公告）号：	CN105039376B	公开（公告）日：	2018-08-03
发明（设计）人：	陈国强;孟德川;王颖;吴琼;陈金春	申请（专利权）人：	清华大学
主分类号：	C12N15/70	分类号：	C12N15/70;C12N15/74;C12P7/42;C12R1/19;C12R1/38;C12R1/01
代理公司：	北京纪凯知识产权代理有限公司 11245	代理人：	关畅;张立娜
地址：	100084 北京市海淀区北京***	国省代码：	北京;11
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摘要：
搜索关键词：	羟基丙酸均聚物共聚物重组构建方法应用
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【权利要求书】：

1.重组菌A的制备方法，包括如下步骤：将重组表达载体pMDC01和重组表达载体p15A-68导入大肠杆菌，得到重组菌A；

所述重组表达载体pMDC01为将序列表中的序列6正向插入到重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd-GdrAB的Xma I单酶切位点得到的载体；

所述重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd-GdrAB为将序列表中的序列4的第18-1841位和序列5的第16-369位正向插入到重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd的Xma I单酶切位点得到的载体；

所述重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd为将序列表中的序列1和序列2正向插入到重组表达载体pZQ03-dhaB的Spe I单酶切位点得到的载体；

所述重组表达载体pZQ03-dhaB为将序列表中的序列3正向插入到pZQ03载体的Xba I单酶切位点得到的载体；

所述重组表达载体p15A-68是按照包括如下步骤的方法制备获得的：分别用限制性内切酶Hind III和SpeI双酶切pBHR68质粒和p15A质粒，酶切后的pBHR68质粒胶回收其大片段，p15A质粒酶切后胶回收其小片段，将胶回收后所得的所述大片段和所述小片段连接后所形成的重组质粒测序，结果为序列表中的序列7、序列11、序列12与氯霉素抗性基因连接，所述重组质粒即为所述重组表达载体p15A-68；

所述p15A质粒的载体全序列如序列表中序列27所示。

2.重组菌B的制备方法，包括如下步骤：将重组表达载体pMDC01导入大肠杆菌，得到重组菌B；

所述重组表达载体pMDC01为将序列表中的序列6正向插入到重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd-GdrAB的Xma I单酶切位点得到的载体；

所述重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd为将序列表中的序列1和序列2正向插入到重组表达载体pZQ03-dhaB的Spe I单酶切位点得到的载体；

所述重组表达载体pZQ03-dhaB为将序列表中的序列3正向插入到pZQ03载体的Xba I单酶切位点得到的载体。

3.重组菌C的制备方法，包括如下步骤：将重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd-GdrAB和pZQ01质粒导入大肠杆菌，得到重组菌C；

所述重组表达载体pZQ03-dhaB-gpp-gpd为将序列表中的序列1和序列2正向插入到重组表达载体pZQ03-dhaB的Spe I单酶切位点得到的载体；

所述重组表达载体pZQ03-dhaB为将序列表中的序列3正向插入到pZQ03载体的Xba I单酶切位点得到的载体。

4.由权利要求1所述的方法制备得到的所述重组菌A。

5.由权利要求2所述的方法制备得到的所述重组菌B。

6.由权利要求3所述的方法制备得到的所述重组菌C。

7.权利要求4所述重组菌A在生产由3-羟基丙酸和3-羟基丁酸组成的共聚物中的应用。