[发明专利]一种提高植物抗逆性的方法及其应用

权利要求书

1.一种提高植物抗逆性的方法，其特征在于，通过PCR扩增获得抗逆基因后，构建植物表达载体，再将植物表达载体转化到农杆菌上，再利用含有表达载体的农杆菌侵染目标植物，培育被侵染的目标植物至获得转抗逆基因的种子。

2.权利要求1所述方法，其特征在于，步骤如下：

1)提取大豆子叶总RNA，反转录后获得cDNA，并以所得cDNA为模板，进行PCR扩增，获得抗逆基因；

2)将步骤1)所扩增的抗逆基因插入到质粒载体上获得植物表达载体；

3)再将步骤2)所得的植物表达载体转化到农杆菌上，获得农杆菌转化子；

4)利用步骤3)所得的农杆菌转化子侵染目标植物，获得侵染植物；

5)培育侵染植物至获得含有抗逆基因的种子。

3.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤1)所述大豆，品种为东农50；所述抗逆基因，抗逆基因GmAKT1，GeneBank登陆号为KM491715.1。

4.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤1)所述PCR扩增，所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2-SEQ ID NO.3所示；扩增条件为：94℃2min；再进行38个循环，其中每个循环降0.2℃：98℃10s，58℃30s，68℃3min；68℃终延伸10min。

5.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2)所述质粒载体，是质粒载体pCXSN。

6.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤3)所述将植物表达载体转化到农杆菌上，是将植物表达载体通过冻融法转化到根瘤农杆菌EHA105中。

7.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤4)所述目标植物为拟南芥或大豆，侵染部位为花絮；所述侵染是将拟南芥的花絮浸入到转化液中28-32s。

8.权利要求7所述方法，其特征在于，所述转化液，是将农杆菌转化子在室温5000rpm下离心10min后，再将沉淀菌液悬浮在1/2MS缓冲液中，加入表面活性剂SilwetL-77制得。

9.权利要求2所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)提取东农50大豆子叶的总RNA，反转录获得cDNA后，以所得cDNA为模板，以如SEQ ID NO.2-SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列为引物，进行PCR扩增，扩增条件为：94℃2min；再进行38个循环，其中每个循环降0.2℃：98℃10s，58℃30s，68℃3min；68℃终延伸10min，获得抗逆基因GmAKT 1扩增产物；

2)通过XcmI和Hind III的酶切作用将步骤1)所得的抗逆基因GmAKT 1扩增产物连接到质粒载体pCXSN上，获得植物表达载体pCXSN-GmAKT1；

3)通过冻融法将步骤2)所得的植物表达载体pCXSN-GmAKT1转化到根瘤农杆菌EHA105中，获得农杆菌转化子pCXSN-GmAKT1；

4)将步骤3)所得的农杆菌转化子pCXSN-GmAKT1在室温5000rpm下离心10min后，再将沉淀菌液悬浮在1/2MS缓冲液中，加入表面活性剂SilwetL-77制得转化液，将拟南芥的花絮浸入到转化液中30s后取出，获得侵染拟南芥；

5)平放步骤4)所得的侵染拟南芥，避光，保鲜膜包裹保持湿度，暗培养1d后，取出除去遮挡，放入培养箱中培养至获得转抗逆基GmAKT1的拟南芥种子。

10.权利要求1-9所述任一方法，其特征在于，用于农作物转基因育种。