[发明专利]预防和/或逆转新发作自身免疫糖尿病的基于微球的组合物

说明书

本申请是国际申请日2007年8月6日、国际申请号PCT/US2007/075292于2009年2月3日进入中国国家阶段、申请号200780028951.8、发明名称“预防和/或逆转新发作自身免疫糖尿病的基于微球的组合物”的申请的分案申请。

发明描述

本申请要求2006年8月4日提交的美国临时申请No.60/835,742和2006年11月8日提交的美国临时申请No.60/864,914的优先权。上述各申请的全部内容在此引入作为参考。

发明背景

总的来说，本公开涉及在NOD小鼠中预防和/或逆转自身免疫糖尿病病症的反义方法。这包括通过注射微球投送AS-寡核苷酸以获得引起负调节活性的治疗效果，具体是在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠模型中。微球使用完全水性的条件制造，该微球中结合有一种或多种反义(AS)寡核苷酸。

微粒、微球和微囊是固体或半固体的颗粒，其直径小于1毫米，也可以小于100微米，它们可以由各种不同的材料形成，包括合成聚合物、蛋白和多糖。微球已经被用于许多不同的应用中，主要是分离、诊断和药物投送。

有许多不同的技术可用于从合成聚合物、天然聚合物、蛋白和多糖制造这些颗粒，包括相分离、溶剂蒸发、乳化和喷雾干燥。一般来说，聚合物形成这些微球的支撑结构，而目标药物结合在聚合物结构中。用于形成微球的示例性聚合物包括在Ruiz等的美国专利No.5,213,812、Reid等的美国专利No.5,417,986、Tice等的美国专利No.4,530,840、Tice等的美国专利No.4,897,268、Tice等的美国专利No.5,075,109、Singh等的美国专利No.5,102,872、Boyes等的美国专利No.5,384,133、Tice等的美国专利No.5,360,610、以及南方研究所(SouthernResearchInstitute)的欧洲专利申请公布No.248,531中描述的乳酸和乙醇酸的均聚物或共聚物(PLGA)；在Illum的美国专利No.4,904,479中描述的嵌段共聚物例如908和泊洛沙姆(poloxamer)407；以及在Cohen等的美国专利No.5,149,543中描述的聚磷腈。使用例如这些聚合物生产的微球表现出荷载效率差，通常仅能在聚合物结构中结合少量百分比的目标药物。因此，为了获得疗效，通常必须施用相当大量的这些类型的微球。此外，这些聚合物一般是疏水性的，对目标药物的溶解有负性影响。在这种情况下使用的典型聚合物包括聚乳酸乙醇酸(PLGA)。

医疗团体的目标是将核酸投送到动物细胞中以治疗各种疾病，包括糖尿病。在许多方法中，通过加入转染剂，能够相对有效地将核酸投送到培养细胞中(体外)。此外，在体内，当给动物投送核酸时，内源核酸酶的存在将导致核酸高速降解。

除了保护核酸免受核酸酶消化之外，核酸投送载体还必需表现出低毒性，必须被细胞有效摄取，并且具有定义明确的、容易制造的配方。临床试验中显示，用于投送的病毒载体在体内能导致严重的不利、甚至是致命的免疫应答。此外，这种方法有可能在体内有致突变效应。通过将核酸复合在不同配方的脂质复合物(例如脂质体或阳离子脂质复合物)中进行投送，可能具有有毒的效应。核酸与各种聚合物或与肽的复合物显示出不一致的结果，并且这些配方的毒性还没有解决。核酸还已经被包裹在聚合物基质中进行投送，但是在这些情况下颗粒的粒度范围广，并且治疗性应用的有效性还没有被证实。这些早先的方法能产生与这里所希望的目标相反的效果，包括免疫系统的刺激。例如，当PLGA被掺入到颗粒中时，PLGA的存在刺激了免疫系统。

因此，对于解决核酸投送中的问题存在着需求，对于微球的开发和制造微球的新方法有正在发展的需求。关于微球的详细情况，特别是关于它们的制备和性质的详细情况，可以在Scott等的美国专利No.6,458,387，Woiszwillo等的美国专利No.6,268,053、No.6,090,925、No.5,981,719和No.5,599,719，Woiszwillo的美国专利No.5,578,709以及Brown等的美国申请公布No.2006/0024240中找到。这些以及所有在本文中指明的参考文献在此引为参考。

发明简述