[发明专利]五种二苯乙烯三聚体的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及化合物领域，尤其涉及五种二苯乙烯三聚体的制备方法及其作为制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物的应用。

背景技术

α-葡萄糖苷酶抑制剂（AGHI）是二十世纪八十年代出现的一类新的抗糖尿病药物，它能通过抑制小肠上皮绒毛膜上的α-葡萄糖苷酶的作用来延缓碳水化合物的消化，进而有效推迟糖尿病人餐后血糖升高的时间及进程，降低糖尿病风险。目前，以阿卡波糖，伏格列波糖为代表的AGHI已成为治疗Ⅱ型糖尿病的一线药物，也可作为治疗Ⅰ型糖尿病的辅助药物。然而，由于这些人工合成的AGHI具有的一些较为明显的副作用（N.Engl.J.Med.,2007,356,1499-1501.），如肝脏疾病，肠胃气胀，腹部痉挛等，因此，人们在过去的二十年中一直试图从动植物和食品中去寻找毒副作用较小的天然AGHI。

可以预见的是，随着老龄化社会的到来，我国的糖尿病发病率越来越高，并且我国以及东南亚地区饮食习惯以碳水化合物为主，因此，开发高效、低毒的AGHI具有巨大的经济效益和社会效益。我国中药资源丰富，许多药材均已被长期的临床实践证明具有较好的降糖作用，将这些具有确切降糖疗效的中药材进行深入系统的活性成分筛选研究，开发出新的高效、低毒的AGHI的可能性将会比传统的“盲筛”要大得多。

基于上述分析，我们对临床常用的31种具有降糖作用的中药材进行了体外α-葡萄糖苷酶（AGH）抑制活性初筛，结果表明，槐米、甘草、僵蚕、香附子等药材醇提物对AGH具有很高的抑制活性，尤以香附子活性为最强，因此我们对香附子的AGHI进行了深入的研究。

香附子为莎草科植物莎草（Cyperus rotundus L.）的干燥根茎，辛、微苦、微甘，平；归肝、脾、三焦经；具有行气解郁、调经止痛的功效，为中医临床的常用中药。药理研究表明，香附子具有抗炎、降血糖、抗血小板、保护神经系统、抗过敏反应等作用。Raut NA等发现（Fitoterapia,2006,77,585-588.）香附子水醇提取物能有效降低四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的血糖；Ardestani A等发现（Int.J Biol. Macromol.,2007,41,572-578.）不同浓度的香附子水醇提取物（25-250μg/mL）能显著抑制晚期糖基化终产物（AGES）的形成。由此可见，香附子的确具备治疗糖尿病的潜力。Tran HHT等（Pharm.Biol.,2014,52,74-77.）采用常规系统分离方法，从香附子中分离出了三种二苯乙烯二聚体化合物（cassigarol E,scirpusin A、scirpusin B），具有一定的AGH抑制活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以体外α-葡萄糖苷酶抑制活性为导向、化学分离与活性评价同步进行的二苯乙烯三聚体化合物的制备方法及其作为制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物的应用。

为实现本发明的上述目的，本发明提供五种二苯乙烯三聚体化合物的制备方法，包括如下步骤。

步骤1、药材超声提取：将香附子粉末用80%甲醇冷浸后超声提取，所得提取物用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位及正丁醇提取部位；将各提取部位分别制成不同浓度的DMSO溶液，进行体外AGH抑制活性检测，确定乙酸乙酯活性部位活性最强。

步骤2、硅胶柱层析分离：所述乙酸乙酯提取部位采用硅胶常压层析分离，分别用不同比例的石油醚、二氯甲烷、甲醇混合溶剂梯度洗脱，所述二氯甲烷与甲醇的体积比分别为9:1、7:3、5:5；然后分别收集各洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得各提取部位；将各提取部位分别制成不同浓度的DMSO溶液，进行体外AGH抑制活性检测，确定二氯甲烷与甲醇的体积比为7:3的提取部位活性最强。

步骤3、大孔树脂柱层析分离：将步骤2中所得活性最强部位用HPD101型大孔吸附树脂分离，分别用40%甲醇水溶液、60%甲醇水溶液、80%甲醇水溶液、100%甲醇梯度洗脱；分别收集各洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得各提取部位；将各提取部位分别制成不同浓度的DMSO溶液，进行体外AGH抑制活性检测，确定60%甲醇水溶液的提取部位活性最强。

步骤4、凝胶柱层析分离：将步骤3中所得活性最强部位用Sephadex LH-20凝胶纯化分离，甲醇洗脱，流速控制为30mL/h，每0.25个柱体积（即0.25BV）收集一次，共收集洗脱液4BV；将各洗脱液进行体外AGH抑制活性检测，确定2.25-3.25 BV洗脱部位活性最强。