[发明专利]一种分离测定托伐普坦中多个杂质的液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种分离测定托伐普坦中多个杂质的液相色谱方法。

背景技术

托伐普坦(Tolvaptan商品名：Samsca)，化学名为N-[4-[(5RS)-7-氯-5-羟基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-2-甲基苯甲酰胺(分子量：C₂₆H₂₅ClN₂O₃)，化学结构式见式Ⅰ，是由日本大冢制药公司(Otsuka Pharm)开发的一种口服选择性非肽类新型精氨酸加压素V2受体拮抗剂。美国FDA于2009年5月批准其用于治疗由充血性心力衰竭(CHF)、肝硬化以及抗利尿激素分泌不足综合征所导致的高容性或等容性低钠血症(血钠＜125mg/L，或者症状轻微)。口服托伐普坦片能明显减轻患者体重和水肿，且不破坏血电解质平衡，并能有效升高CHF患者并发的低钠血症。临床研究表明，托伐普坦与其它抗心衰药物相比耐受性好，治疗中不必限制水的摄入，不良反应轻，应用前景广阔。

托伐普坦可以通过下述路线合成：

其中，式Ⅳ所示的N-[4-[7-氯-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-2-甲基苯甲酰胺(分子量：C₂₆H₂₃ClN₂O₃)是托伐普坦合成路线的重要中间体，同时也是托伐普坦的主要降解产物。

式(a)所示的邻甲基苯甲酰氯，是合成托伐普坦的重要起始物料，式(b)所示的对甲基苯甲酰氯和式(c)所示的间甲基苯甲酰氯均为其位置异构体杂质。由于邻甲基苯甲酰氯(a)在紫外光波长下无吸收，且较易水解，无法通过高效液相色谱法进行检测。即使采用现有气相色谱法进行检测，也无法对其位置异构体杂质对甲基苯甲酰氯(b)和间甲基苯甲酰氯(c)进行质量控制。

因此，当对甲基苯甲酰氯(b)参与托伐普坦的合成反应，会生成式Ⅱ所示的N-[4-[7-氯-5-羟基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-4-甲基苯甲酰胺和式Ⅴ所示的N-[4-[7-氯-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-4-甲基苯甲酰胺；而间甲基苯甲酰氯(c)参与托伐普坦的合成反应，则生成式Ⅲ所示的N-[4-[7-氯-5-羟基-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-3-甲基苯甲酰胺和式Ⅵ所示的N-[4-[7-氯-5-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-3-甲基苯甲酰胺。

可见，由于邻甲基苯甲酰氯中含有难以控制的位置异构体杂质，会导致式Ⅳ化合物含有杂质Ⅴ、Ⅵ，这些杂质会在制备托伐普坦的反应中分别生成式Ⅱ和式Ⅲ化合物。因此，以上五个杂质的存在对托伐普坦的临床用药安全构成了潜在的威胁。然而，仅有托伐普坦喷雾干燥粉质量标准的复核说明(标准号：JX20110046)报道了杂质Ⅳ的检测。而托伐普坦Ⅰ的位置异构体杂质Ⅱ、Ⅲ以及托伐普坦中间体Ⅳ的位置异构体杂质Ⅴ和Ⅵ的检测方法的并未见相关报道。

因此，实现托伐普坦的位置异构体杂质及托伐普坦中间体的位置异构体杂质的分离测定对于托伐普坦质量控制方面具有现实意义。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种分离测定托伐普坦中多个杂质的液相色谱方法，实现了托伐普坦及其五个杂质的分离测定。包括以下步骤：

(1)获得各杂质对照品的保留时间以及峰面积与浓度的对应关系：

a、分别取杂质Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的对照品，加入溶剂溶解，作为对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行检测，检测条件为：

检测波长：230nm～280nm；

色谱柱：Symmetry shield RP18；

流动相：乙腈-含有0.2％磷酸的水溶液，其中，乙腈的体积分数为43-47％；

b、记录各杂质相应的保留时间、浓度和峰面积；

(2)检测待测样品：

c、取待测托伐普坦样品，加入溶剂溶解，作为供试品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测，以步骤a相同的检测条件检测；

d、根据步骤b的结果确定步骤c所得谱图中的各峰归属，记录供试品溶液中杂质Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ的峰面积，按外标法计算供试品中杂质Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ的含量。