[发明专利]一种山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法

权利要求书

1.一种山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法，其特征在于，包括诱导愈伤组织、风干、超低温保存、化冻的步骤。

2.根据权利要求1所述的山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法，其特征在于，所述诱导愈伤组织包括：

步骤1：以山葡萄茎段为材料接种在下列培养基中：

MS培养基；

培养条件：温度25±2℃，光照强度1200Lux-1600Lux，每天光照16h诱导愈伤组织。

3.根据权利要求1所述的山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法，其特征在于，所述风干包括：将愈伤组织切块并进行风干；所述超低温保存包括：将风干后的山葡萄愈伤组织浸入到含有冷冻保护液的冻存管中，然后将冻存管迅速投入到液氮中进行超低温保存；所述化冻包括：将液氮中保存的愈伤组织取出置于水浴锅中化冻。

4.根据权利要求1所述的山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法，其特征在于，在化冻之后，还包括以下步骤：

步骤a：用MS培养基添加质量百分比含量为3％的蔗糖液体作为最终培养基冲洗两次，每次10～12分钟；

步骤b：洗涤后，转移到下列培养基中：

MS培养基

培养条件：在25℃进行暗培养2周，然后移到光照强度1200Lux～1600Lux，每天光照16h。

5.根据权利要求3所述的山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法，其特征在于，所述冷冻保护液按质量百分比计，包括DMSO10％、乙二醇10％、葡萄糖8％，余量：超纯水。

6.根据权利要求3所述的山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法，其特征在于，所述将愈伤组织切块并进行风干包括：将愈伤组织切成0.2*0.2cm小块置于超净工作台中鼓风干燥30min。

7.根据权利要求3所述的山葡萄愈伤组织玻璃化超低温保存方法，其特征在于，步骤4中，所述水浴锅的温度为40℃。