[发明专利]缀合物及其制备方法、梅毒检测试剂及梅毒检测试剂盒有效

专利信息
申请号: 201510358186.2 申请日: 2015-06-25
公开(公告)号: CN105004858B 公开(公告)日: 2017-03-01
发明(设计)人: 孟媛;李瑞净;卢盛萍;刘莉莉 申请(专利权)人: 菲鹏生物股份有限公司;广东菲鹏生物有限公司
主分类号: G01N33/571 分类号: G01N33/571
代理公司: 广州华进联合专利商标代理有限公司44224 代理人: 何平
地址: 518000 广东省深圳市南山区西丽留仙洞中山园路1001号T*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 缀合物 及其 制备 方法 梅毒 检测 试剂 试剂盒
【说明书】:

技术领域

发明涉及免疫检测领域,特别是涉及一种缀合物及其制备方法和应用。

背景技术

梅毒(syphilis)又称为“霉疮”、“广疮”、“棉花疮”或“杨梅疮”,是一种慢性系统性传染病,被列为世界三大慢性传染病之一。梅毒病原体是梅毒螺旋体,亦称苍白螺旋体(Treponema pallidum,TP),由德国的霍夫曼和谢文定在1905年首次发现。梅毒主要通过性接触和血液传播,而妇女怀孕时如果感染梅毒,会经由胎盘传染给胎儿,造成先天性梅毒。梅毒可产生多种多样的症状和体征,早期侵犯生殖器和皮肤,晚期侵犯全身各器官,尤其是心血管和中枢神经系统,且时隐时显,病程可持续很长,是仅次于艾滋病的严重危害我国人民身体健康的性传播疾病。据报道全世界每年约有一千二百万例新感染病例,近年来梅毒发病率在我国也有上升的趋势,据2014年梅毒重点疫情报告,2009年以来梅毒位于乙类传染病报告发病数的第三,尤其是在产前门诊筛查出的梅毒抗体阳性的孕妇显著增加,给我国的公共卫生带来危害。但要确实证明感染梅毒并不容易,因为感染早期并无临床症状,潜伏期在10天至90天,只能靠检测梅毒血清来帮助诊断,目前病人血清中的标志物主要是检测梅毒螺旋体(TP)抗体。

目前,国内外对梅毒的发病机制和诊断方式进行了大量的研究,梅毒的实验室诊断主要包括:病原学诊断、组织病理学诊断、基因诊断、脑脊液检查及血清学诊断,前四种诊断方法易受条件制约、临床较少开展。血清学诊断根据使用抗原不同分为两类:非梅毒螺旋体抗原血清学实验(非特异性TP抗体)和梅毒螺旋体抗原血清学实验(特异性梅毒抗体),非梅毒螺旋体抗原血清学试验方法主要包括快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、不加热血清反应素试验(USR)、研究实验室试验(VDRL)及甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),非梅毒螺旋体抗原血清学实验的主要缺点是敏感性和特异性不高,许多非梅毒性疾病,包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性迁延性肝炎等均可呈阳性反应。梅毒螺旋体抗原血清学试验主要包括:梅毒螺旋体颗粒凝集实验(TPPA)、梅毒螺旋体血球凝集实验(TPHA)、荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、快速免疫层析试验(RT)、免疫印迹试验(WB)及酶联免疫吸附试验(ELISA),其中TPPA、TPHA、FTA-ABS、RT、WB试验虽然可提高检测的特异性,但有的需制备大量病原体,有的检测成本较高、操作繁琐,且质量难以控制,不利于大规模的血液筛查工作。因此,研制快速、简便、灵敏且特异的TP体外诊断试剂是当前的主要任务。

80年代初,随着分子生物学技术的发展,特别是基因工程(DNA重组)技术的出现使梅毒螺旋体的研究进入一个新的阶段。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法应用免疫学技术测定标本,通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质,是一种敏感的测定的方法。酶联免疫吸附试验主要采用双抗原夹心法检测梅毒抗体,将检测试剂中的抗原用可微量测定的物质加以标记,通过标记物将信号放大,得出最终的判定结果。然而检测试剂中的抗原活性位点容易被标记物包裹,抗原活性位点被包埋将导致抗原活性降低。

发明内容

基于此,有必要提供一种抗原活性位点不容易被标记物包裹的缀合物,以及其制备方法和应用。

一种缀合物,包括突变型梅毒检测抗原和标记物,所述突变型梅毒检测抗原由梅毒螺旋体抗原中间的1或2个赖氨酸突变后得到,所述标记物标记在所述突变型梅毒检测抗原的N端或C端的赖氨酸位点。

在一个实施例中,所述突变型梅毒检测抗原由梅毒螺旋体抗原中间的1或2个赖氨酸突变为甘氨酸后得到。

在一个实施例中,所述突变型梅毒检测抗原包括:

(a)、由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成的多核苷酸编码得到的多肽;

(b)、与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少98%同源性的多核苷酸编码得到的多肽;或

(c)、由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成的多核苷酸,其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得到的多肽。

在一个实施例中,所述标记物为酶、化学发光物质、荧光物质、放射性物质和胶体中的至少一种。

一种上述缀合物的制备方法,包括如下步骤:

步骤一、提供用于表达突变型梅毒检测抗原的基因表达序列,所述突变型梅毒检测抗原由梅毒螺旋体抗原中间的1或2个赖氨酸突变后得到;

步骤二、将所述基因表达序列连接到基因表达载体中;

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