[发明专利]鸭疫里默氏菌OmpA/MotB去信号肽重组蛋白、其抗体及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种鸭疫里默氏菌OmpA/MotB去信号肽重组蛋白、其抗体及制备方法和应用。该重组蛋白具有与天然OmpA/MotB蛋白相似的免疫反应活性，能够与RA抗体特异性结合，而与鸭沙门氏菌阳性血清、鸭大肠杆菌阳性血清、鸭肿头败血症病毒阳性血清、禽流感病毒(H5)阳性血清、鸭瘟病毒阳性血清、鸭肝炎病毒阳性血清等不产生交叉反应，可作为检测RA全菌抗体的检测抗原应用，且由于该重组蛋白非全细菌，应用其进行检测时无散毒危险；此外，该重组蛋白的制备方法简单，适于工业化大规模生产，能够实现产品的标准化，利于不同实验室之间的结果比较。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种鸭疫里默氏菌OmpA/MotB去信号肽重组蛋白、其抗体及制备方法和应用。

背景技术

鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer，RA)所致鸭疫里默氏菌病(Riemerella anatipestifer infection)是家鸭、火鸡和多种其它鸟类的一种接触传染性疾病，也称为新鸭病((New duck syndrome)、鸭败血症(Duck septicaemia)、鸭疫综合症(Anatipestfer syndrome)、鸭疫败血症(Anatipestifer septicaemia)、鸭疫巴氏杆菌病(Pasteurella anatipestifer infection)和鸭传染性浆膜炎(Infectious serositis)。它是鸭的一种常见的细菌性传染病，主要侵害2—8周龄雏鸭，以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎为主要的病理特征。

引起鸭疫里默氏菌病的病原为鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer，RA)。此菌为革兰氏阴性小杆菌，无芽胞，菌体无菌毛或鞭毛，不能运动，有荚膜，瑞氏染色呈两极浓染。纯培养菌涂片，美蓝染色，可见菌体多为杆状，常单个存在，少数成双排列，偶见个别菌体呈长丝状排列。RA的血清型多而复杂，血清型超过21个，且各血清型之间缺乏有效的交叉免疫保护，这给RA的疫苗防治带来一定困难。比较有效的方法是针对当地主要流行血清型，选取相应菌株研制疫苗，以达到更有效的预防效果。

细菌外膜蛋白(OMP)是革兰氏阴性菌特有的，是存在于外膜之中及与外膜有关的所有蛋白的总称。外膜在细菌胞浆膜(内膜)和肽聚糖层的外侧，包围整个细菌，是革兰氏阴性菌细胞壁成分中所特有的结构。外膜蛋白由6个家族组成：包括OmpA蛋白、OmpX蛋白、水解磷脂酶A、普通膜孔蛋白(OmpF，PhoE)、底物特异性膜孔蛋白(LamB，ScrY)以及金属依赖性铁运输蛋白FhuA和FepA蛋白，共有20余种，但多数功能尚不清楚。外膜蛋白A(Outer MembraneProtein A，OmpA)是革兰氏阴性菌的主要外膜蛋白，OmpA与细菌的生物膜形成有关，可维持外膜的完整，缺少OmpA的细菌，细胞膜不稳定。OmpA是一种跨膜蛋白，有研究表明，该蛋白除了具有维持外膜结构的作用外，其重要作用是在细菌感染早期与细胞基质相互作用，定植于宿主细胞，从而达到吸附作用。据报道，OmpA是RA的一种毒力因子，具有致病作用，因此，在鸭疫里默氏菌病的诊断和疫苗研制上可能具有重要价值。此外，OmpA基因核酸序列高度保守，有着良好的免疫原性，能够激发机体的体液免疫和细胞免疫，并可通过遗传工程技术得到大量表达。对于异种血清型，OmpA可起到免疫交叉保护的作用，是一种潜在的共同保护性抗原，它是被公认的RA高保护性抗原。再者，OmpA有助于RA逃逸机体的免疫防御。