[发明专利]一种卵黄高磷蛋白磷酸肽富集方法

说明书

本发明公开了一种卵黄高磷蛋白磷酸肽富集方法，属于提取纯化分离领域。本发明方法是以介孔/大孔二氧化钛(TiO₂)为吸附材料富集卵黄高磷蛋白磷酸肽，此法得到的卵黄高磷蛋白磷酸肽的N/P为4.5。介孔/大孔TiO₂不仅可以利用金属氧化物TiO₂对磷酸基团的特异性亲和作用，而且介孔‑大孔结构的高比表面积和良好的孔道结构提供了更多的活性结合位点。当富集条件为：pH为2.5‑4，初始多肽浓度为12‑20mg/mL，吸附时间为5‑20min，此时得到的PPPs的纯度为4.3‑4.8，对应的吸附量为42‑53mg/mL。本发明的方法不仅操作简单，而且快速有效，有利于在工业化生产中应用。

技术领域

本发明涉及一种卵黄高磷蛋白磷酸肽富集方法，属于提取纯化分离领域。

背景技术

蛋黄蛋白粉是蛋黄卵磷脂工业化生产的副产物，越来越来的学者对其进行了综合研究并取得了一些进展。卵黄高磷蛋白(Phosvitin，PV)是脱脂蛋黄蛋白粉中的主要含磷蛋白，一级结构中含有217个氨基酸残基，其中124个是丝氨酸残基，约占总氨基酸残基含量的56％。已有众多研究表明，卵黄高磷蛋白可与Ca²⁺，Mg²⁺，Mn²⁺，Co²⁺，Sr²⁺，Fe²⁺，Fe³⁺等结合。由于卵黄高磷蛋白与金属离子结合牢固，不易被水解，使得其生物学效价较低，不利于营养吸收。现已证实，能与钙形成可溶性络合物的主要功能团是磷酸酰丝氨酸，所以将磷酸酰丝氨酸残基含量高的卵黄高磷蛋白进行水解，其水解产物卵黄高磷蛋白磷酸肽(PhosvitinPhosphopeptides，PPPs)可作为很好的钙吸收促进剂，不仅能增加钙在小肠内的吸收及其在体内的蓄积，而且卵黄高磷蛋白磷酸肽诱导的钙代谢无需维生素D的参与，且能促进铁、锌等离子的吸收。

目前关于卵黄高磷蛋白磷酸肽研究仅限于实验室水平。常规的PPPs制备方法是先从蛋黄粉中提取出卵黄高磷蛋白PV，然后对PV进行处理，纯化得到PPPs。也有报道，是先对蛋黄粉进行脱脂，然后对脱脂后的蛋黄粉进行处理得到粗多肽，再纯化得到PPPs。采用的纯化方法为乙醇钙沉淀法、膜分离法和离子交换树脂等方法。乙醇钙沉淀法虽然方法简单，但是有机试剂用量大，对环境有一定的污染；膜分离法膜污染情况严重，需要进行清洗维护；离子交换树脂法需要使用前和再生时进行处理，操作复杂。也有报道是磁纳米颗粒富集法进行纯化的，但是磁纳米颗粒不仅稳定性差(重复使用三次时已不能发生吸附)，而且洗脱过程中使用的咪唑溶剂不符合食品领域的应用。

发明内容

为了克服目前卵黄高磷蛋白磷酸肽(Phosvitin Phosphopeptides，PPPs)，纯化过程中存在的上述问题，本发明一种卵黄高磷蛋白磷酸肽富集方法，直接以利用蛋黄卵磷脂生产的副产物为原料，省去脱脂步骤，然后进行脱磷、酶解，制备粗多肽。本发明采用介孔/大孔TiO₂(macro-mesoporous titanium dioxide，MMTD)为富集材料，直接将PPPs特异性吸附出来，然后根据TiO₂的性质进行洗脱(碱性条件下PPPs与TiO₂发生离子排斥反应)，操作简便、节省时间，不仅提高了吸附效率，也大大减少了生产成本。

本发明提供了一种卵黄高磷蛋白磷酸肽富集方法，所述方法是先将蛋黄蛋白粉进行部分脱磷处理，然后使用胰蛋白酶对部分脱磷后的蛋黄蛋白粉进行酶解，得到粗多肽，再采用介孔/大孔TiO₂材料对粗多肽进行吸附，洗脱，即得到卵黄高磷蛋白磷酸肽。

所述蛋黄蛋白粉，在本发明的一种实施方式中，是蛋黄卵磷脂生产中的副产物。