[发明专利]一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物

说明书

技术领域

本发明涉及免疫技术检测领域，特别涉及可用于化学发光免疫检测的一种高效酶促化学发光底物。

背景技术

化学发光是指在一个反应体系中通过化学反应生成一种激发态的产物(C^*)，在其回到基态的过程中，释放出的能量转变成光子(能量hγ)，从而产生发光现象。

化学发光免疫分析是继酶免技术、放免技术、荧光免疫技术之后发展起来的一种超高灵敏度的微量检测技术，具备灵敏度高、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染等优点，因此成为世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术，是目前免疫定量分析最理想的方法。

在化学发光免疫分析中，常用发光物质包括鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、1,2-二氧杂环丁烷化合物(1,2-dioxetane compound)。其中异鲁米诺和吖啶酯作为示踪分子直接标记，属于闪光型化学发光反应。鲁米诺和1,2-二氧杂环丁烷化合物依靠酶作为示踪分子标记，属于酶促辉光型化学发光反应。1,2-二氧杂环丁烷化合物是最新的超灵敏的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AP)底物，在适宜的缓冲液中，随着碱性磷酸酶(AP)的催化水解作用，1,2-二氧杂环丁烷化合物分解发出的信号可持续20小时以上，是理想的化学发光物质。国外生产厂家研制出以碱性磷酸酶(AP)为标记物，1,2-二氧杂环丁烷化合物-3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基)苯-1，2-二氧杂环丁烷(AMPPD)为底物的试剂盒，与之相匹配的有DPC、Access Substrate、BioMerieux、Olympus全自动化学发光系统。

然而AP催化AMPPD的化学反应是水解反应，虽然具有较长的平台期，但是其发光强度较低，并且起光较慢，因此，该化学反应仍有待优化。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种发光信号强、进入平台期较快、持续时间长、常温保存期长的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物，其特征在于，所述化学发光底物以水为溶剂，含有以下组分：

2-氨基-2-甲基-1-丙醇；

AMPPD；

以及脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸钠与荧光化合物偶联的发光增强剂(记作HOBEP系列化合物)。

脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸钠与荧光化合物的偶联可起到共表面活性剂的作用，能使该复合物更好的结合到化学发光缓冲体系中。

当HOBEP系列化合物溶于水后，在浓度较低时呈单分子分散状态，或被吸附在溶液的表面上，从而降低表面张力；而HOBEP系列化合物的浓度增加至溶液表面已经饱和而不能再吸附时，其分子即开始转入溶液内部，由于HOBEP系列化合物分子的疏水部分与水的亲和力较小，而疏水部分之间的吸引力较大，当达到一定浓度时，许多HOBEP系列化合物的疏水部分便相互吸引，缔合在一起，形成缔合体，即胶束，可触发从激发态裂解产物到荧光表面活性剂之间的能量转移，因此可大幅度提高化学发光效率。

其中，所述发光增强剂的结构式为以下的式(Ⅰ)、式(Ⅱ)、式(Ⅲ)、式(Ⅳ)及式(Ⅴ)的其中一种：

(1)HOBEP-1：与香豆素类荧光化合物偶联

(2)HOBEP-2：与荧光素类荧光化合物偶联

(3)HOBEP-3：与萘酰亚胺类荧光化合物偶联

(4)HOBEP-4：与罗丹明类荧光化合物偶联

(5)HOBEP-5：与苯并咪唑类荧光化合物偶联

其中，

R₁选自C_1-28烷基的其中一种；

R₂选自以下取代基中的其中一种：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基；

n取5-10的整数。

在具体实施例中，所述酶促化学发光底物还含有MgS0₄、ZnCl₂及防腐剂。

作为优选的具体实施方式，本发明的酶促化学发光底物以水为溶剂，含有以下组分：

在具体实施例中，所述防腐剂为ProClin300。