[发明专利]单纯疱疹病毒性角膜炎疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，本发明涉及一种单纯疱疹病毒性角膜炎疫苗及其制备方法。

背景技术

单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)是主要由HSV-1型感染眼部所引起的角膜炎，占角膜病的首位，因其高复发率、高致盲率而被国内外公认为最常见的致盲眼病之一。据调查，在我国，角膜盲是仅次于白内障盲居第二位，而HSK盲为角膜盲首位，约占42.85％；在发达国家的发病率为每年5.9/10⁵～20.7/10⁵，患病率为149/10⁵。HSV-1初次感染后往往引起眼睑炎及角膜结膜炎，并且病毒易潜伏在局部神经节，主要为三叉神经节(TG)，日后当免疫功能低下，如感冒、劳累、不恰当地应用皮质内固醇激素以及免疫抑制剂时，会导致病毒被从新激活，产生复发性的HSK。有学者统计，其3年的复发率可达到33.5％。近年来，由于抗生素和皮质类固醇的广泛应用，HSK发病率有逐渐增高趋势。

针对HSV-1疫苗的研究经历了较长的历史过程，早在20世纪20、30年代就制成了灭活全病毒疫苗。现在的HSV-1疫苗有多种形式，如肽或蛋白质疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、复制缺陷型病毒、重组载体疫苗、DNA疫苗等，到目前为止，虽有部分疫苗进行了临床试验，但结果均不理想，所以至今尚无有效疫苗应用于临床，研制新型的抗HSV-1的疫苗将是今后研究的重点。

HSK在感染的情况下，病毒并不能被彻底的杀灭，追其主要原因，是HSV-1自身具备免疫逃逸，影响了主要组织相容性复合体类(MHC)分子介导的病毒抗原的有效递呈，从而不能诱导持久高效的免疫反应，故增强机体对病毒抗原的有效递呈是治疗HSK的关键。机体中存在一类专职行使抗原递呈作用的细胞，被称为专职抗原递呈细胞(APC)，而树突状细胞(DC)是目前体内已知的功能最强的抗原递呈细胞，其能够刺激初始T细胞增殖进而启动机体免疫应答，而巨噬细胞或B淋巴细胞仅能刺激已活化的或记忆性T细胞，故DC在诱导抗原特异性免疫反应中起着重要作用。靶向DC的疫苗是近来发展的新型疫苗，其是通过将外源目的抗原分子体内表达后靶向于DC表面的特异性受体，此受体能介导抗原分子的加工处理以及递呈给T细胞，从而显著增强DC的抗原递呈，提高免疫的功效。DEC-205是其中主要采用的受体之一，因它是较特异性地表达于DC表面并是介导抗原递呈的主要分子之一。NLDC-145是针对小鼠DEC-205的单克隆抗体，有文献报道了其的序列，此为开展靶向DC的DNA疫苗研究提供了便利。

不同的疫苗接种途径所致的免疫效果也有差异。HSK是一种眼表粘膜感染性疾病。可采取眼表黏膜接种疫苗。纳米技术已经应用于DNA疫苗，纳米粒子具有直径小、作用时间长、缓慢释放及提高生物利用度的特性。纳米疫苗粘膜免疫接种可以增加抗原递呈，减缓抗原释放，并能激活APCs和抗原特异性T细胞，提高粘膜免疫水平，在眼表给药系统中发挥了其潜在的优势。

发明内容

针对上述背景技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种单纯疱疹病毒性角膜炎疫苗，以安全有效地防治单纯疱疹病毒性角膜炎。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种单纯疱疹病毒性角膜炎疫苗，由质粒pRSC-NLDC145*gD-IL-21构成,采用纳米材料壳聚糖包裹；其中：gD为单纯疱疹病毒I型的主要包膜糖蛋白之一，采用胞外区基因组，NLDC-145是针对小鼠DEC-205的单克隆抗体，IL-21为免疫佐剂。

所述质粒pRSC-NLDC145*gD-IL-21的浓度为5μg/μl。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述单纯疱疹病毒性角膜炎疫苗的方法，其技术方案为：

一种单纯疱疹病毒性角膜炎疫苗的方法，包括如下步骤：

(1)HSV-1gD；NLDC145基因的获取；

(2)pRSC-NLDC145*gD-IL-21质粒的构建；

(3)制备壳聚糖/质粒DNA纳米疫苗。

进一步的，所述步骤(1)包括：

(1a)细胞和病毒的培养；

(1b)HSV-1基因组DNA的提取；