[发明专利]一种液相基因芯片检测方法、液相基因芯片及试剂盒

说明书

本发明涉及核酸的检测方法，特别涉及一种液相基因芯片检测方法。本发明还涉及一种液相基因芯片及其制备方法；还涉及一种试剂盒及其制备方法。一种液相基因芯片检测方法，包括利用液相基因芯片获得液相基因芯片反应体系的过程，所述液相基因芯片包含微珠‑第一引物偶联物，所述液相基因芯片反应体系包含分子信标。本发明还涉及一种液相基因芯片，所述液相基因芯片包含所述微珠‑第一引物偶联物。本发明还涉及一种液相基因芯片检测方法所用的试剂盒，该试剂盒包括所述液相基因芯片。本发明解决了液相基因芯片检测中需要对PCR扩增产物管进行开盖及对PCR扩增产物进行移取的动作导致后续样本进行PCR扩增时被污染或存在被污染的风险的技术问题。

技术领域：

本发明涉及核酸的检测方法，特别涉及一种液相基因芯片检测方法。本发明还涉及一种液相基因芯片及其制备方法；还涉及一种试剂盒及其制备方法。

背景技术：

核酸检测是现代生物分析的前沿技术，已被广泛应用于分子遗传学、免疫学、肿瘤学及微生物学等方面的临床诊断。常规的核酸检测有多种技术方法，如荧光定量PCR(QiY.Appl Environ Microbiol,2001,67(8):3720-3727)、RFLP(限制性酶切片段长度多态性，S.R.Klee.J.Applied Microbiology.2006,100,1364-5072)、基因芯片、DNA测序等。这些技术或操作繁琐，操作时间长，或检测通量低，不适合大样本多位点检测。

生物芯片包括基因芯片和蛋白芯片两大类，按寻址方式和最终检测载体又可分为固相芯片和液相芯片。液相芯片技术是生物芯片技术中的一种，也称悬浮阵列技术(suspension array)，是把微珠(或称微球)用荧光染料进行编码，然后将荧光染料编码的微珠交联上1种特定探针分子(探针分子通过氨基与羟基交联到微珠表面)。应用时，先把针对不同检测物的编码微珠混合，再加入微量待检样本DNA，如果待检样本DNA中存在目的分子，在悬液中目的分子与微珠表面交联的探针分子进行特异性结合，在1个反应孔内可同时完成多达100种不同的生物学反应(分子杂交或免疫反应)。最后用激光流式仪等鉴定微珠颜色以判断结果，同时通过目的分子上的报告分子完成反应的定量分析。由于分子杂交或免疫反应是在悬浮溶液中进行的，所以其检测速度极快，可在1个微量液相反应体系中同时检测100个指标。它同样具有固相芯片的高通量、高集成、微型化、连续化和自动化等优点，还具有液相反应的高敏感性、高重复性、检测线性范围宽、反应快速等优点，但是步骤比较复杂，操作时间长，不能闭管操作，反应液易受污染。

液相芯片方法核心内容是获得“微珠-探针分子-目的分子-报告分子复合物”，目前常规的方法需要经过三个步骤来获得。第一步，PCR扩增获得大量目的分子；第二步，微珠-探针分子(或称微珠-探针偶联物)与PCR扩增产物即目的分子结合，获得微珠-探针分子-目的分子复合物；第三步，微珠-探针分子-目的分子复合物与报告分子(PE，或称藻红蛋白)结合，获得微珠-探针分子-目的分子-报告分子复合物，用于信号检测。此种方法需要的步骤多，第一步后需要对PCR扩增产物管进行开盖和对PCR扩增产物进行移取。因为PE在PCR的温度下会失活，所以只能在PCR扩增之后加入，第三步必定需要对PCR扩增产物管进行开盖。对PCR扩增产物管进行开盖和对PCR扩增产物进行移取增加了后续样本进行PCR扩增时被污染的风险，当后续样本进行PCR扩增被污染时，会发生假阳性。

公开号为CN102827948A、公开日为2012年12月19日的中国发明专利申请公开了基于磁性引物扩增的流式细胞术检测食源性病毒的方法及试剂盒。该方法包括模板的准备、设计合成用于扩增食源性病毒保守序列的引物、制备磁性引物、PCR反应、分离纯化、微珠与杂交探针杂交、检测等步骤。该方法也需要对PCR扩增产物管进行开盖及对PCR扩增产物进行移取的动作，可能导致后续样本进行PCR扩增时被污染。

发明内容