[发明专利]一种雷帕霉素与长春新碱的药物组合

说明书

技术领域

本发明涉及药物技术领域，尤其是涉及一种雷帕霉素与长春新碱的药物组合。

背景技术

目前儿童肿瘤比较多发，通常采用手术或化疗治疗，比如儿童视网膜母细胞瘤的治疗方式主要是手术摘除眼球和局部化疗，其中摘除眼球的方法虽然可根治肿瘤，但由于付出代价高昂，已逐渐被淘汰，化疗成为主要的方法，细胞毒性的药物是目前各类儿童实体肿瘤的主流化疗方法；儿童视网膜母细胞瘤的化疗方案局限于传统细胞毒性药物长春新碱、卡铂、环磷酰胺；长春新碱(vincristine,VCR)最为常用，微管抑制剂长春新碱具有广谱抗肿瘤作用，但毒副作用较高；雷帕霉素(rapamycin,rapa)是一种新型大环内酯类免疫抑制剂，雷帕霉素通过不同的细胞因子受体阻断信号传导，阻断T淋巴细胞及其他细胞由G1期至S期的进程，从而发挥免疫抑制效应，mTOR抑制剂雷帕霉素具有广泛的生物学效应，除作为免疫抑制剂，也用于黑色素瘤等多种成人高度恶性肿瘤。

发明内容

本发明是为了降低化疗用药量和毒性，增加化疗效果，提供一种用量少，毒性低，效果显著的雷帕霉素与长春新碱的药物组合。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种雷帕霉素与长春新碱的药物组合，包括雷帕霉素、长春新碱，二者化学式分别为:

本方案通过细胞系体外培养和细胞活力实验，发现极低剂量的mTOR抑制剂雷帕霉素与化疗药物微管抑制剂长春新碱可协同杀伤、抑制多种儿童实体肿瘤，包括视网膜母细胞瘤和肾母细胞瘤；其中，微管抑制剂长春新碱造成肿瘤细胞有丝分裂障碍，而mTOR抑制剂雷帕霉素造成肿瘤细胞细胞代谢障碍，二者组合诱导肿瘤细胞凋亡。

作为优选，所述的药物组合中，雷帕霉素含量为0.01-1μM，长春新碱含量为10nM。雷帕霉素联用长春新碱对体外培养的视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44抑瘤率高达80-85％，联用效果比药物单用效果提高30-40％，这是一种新型的药物联用杀伤视网膜母细胞瘤的方法。

作为优选，所述的药物组合中，雷帕霉素含量为1-5μM，长春新碱含量为20nM。肾母细胞瘤细胞G401对雷帕霉素的敏感性稍差，但1μM以上的雷帕霉素可以显著协同长春新碱抑制肾母细胞瘤细胞G401增殖并诱导凋亡。

因此，本发明具有如下有益效果：(1)与常规用药量相比，本方案用量少，毒性低；(2)杀伤、抑制视网膜母细胞瘤和肾母细胞瘤的效果显著。

附图说明

图1是本发明针对视网膜母细胞瘤效果示意图。

图2是本发明针对肾母细胞瘤效果示意图。

图3是本发明药物单用与联用对视网膜母细胞瘤和肾母细胞瘤凋亡诱导作用，包括HRP化学发光法显影凋亡标记蛋白caspase3条带。

图4是本发明中雷帕霉素抑制肾母细胞瘤细胞的原理示意图，包括HRP化学发光法显影自噬相关蛋白条带。

图5是图4中siRNA干扰自噬相关基因ATG7后细胞活力与对照组的比较。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的描述。

实施例1，一种雷帕霉素与长春新碱的药物组合，包括雷帕霉素、长春新碱，其中雷帕霉素含量为0.01-1μM，长春新碱含量为10nM。

具体实施过程是，

细胞系和培养方法：视网膜母细胞瘤细胞系HXO-Rb44，此细胞为悬浮细胞，用含10％胎牛血清的1640培养基培养于37℃孵箱，含5％二氧化碳和饱和水蒸气；

主要试剂：雷帕霉素(rapa)，长春新碱(VCR)，40％丙烯酰胺凝胶贮存液，Tris碱，TEMED，SDS，蛋白酶抑制剂，蛋白上样标准品，CCK8试剂盒，BCA试剂盒和HRP化学放光检测试剂盒；

抗体：一抗包括LC3，GAPDH，p62，caspase3，抗鼠与抗兔HRP偶联二抗；

细胞活力实验：将视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44以1×10∧4个/孔的密度接种于96孔板，加入药物后继续培养24小时，然后加入CCK8试剂，用酶标仪读取405nm吸光度，根据读数计算细胞相对数目，做出药物对细胞的抑制曲线；

统计分析：每种药物剂量重复5次，每次4个复孔，结果以平均值±标准误表示，在低剂量(0.01-0.1μM)区间，雷帕霉素与长春新碱有显著的协同作用，抑制肿瘤细胞，如图1所示，其中X轴为雷帕霉素作用浓度(μM)，Y轴为抑瘤率(％)，曲线一为雷帕霉素单独作用效果，曲线二为雷帕霉素添加长春新碱组合作用效果；