[发明专利]枯草杆菌酶变体

说明书

本申请是申请日为2003年11月05日、申请号为“201010167560.8”、名称为“枯草杆菌酶变体”的发明专利申请(其为申请日为2003年11月05日、申请号为“200380102792.3”、国际申请号为PCT/DK2003/000756)的分案申请)的分案申请。

技术领域

本发明涉及在一种或多种特性上与亲本枯草杆菌酶不同的新枯草杆菌酶(subtilase)变体，所述特性包括：洗涤性能、热稳定性、储藏稳定性或催化活性。本发明的变体适用于例如清洁或洗涤剂组合物，如洗衣洗涤剂组合物和洗盘组合物，包括自动洗盘组合物中。本发明还涉及编码所述变体的经分离DNA序列、表达载体、宿主细胞，以及产生和使用本发明变体的方法。而且，本发明涉及包含本发明变体的清洁和洗涤剂组合物。

背景技术

在洗涤剂工业中，酶已在洗涤制剂中使用了30年以上。用于这些制剂的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶和其它酶或它们的混合物。商业上最为重要的酶是蛋白酶。

数量不断增长的商用蛋白酶是天然存在的野生型蛋白酶的蛋白质工程化变体，如和(Novozymes A/S)、Maxatase^TM、Maxacal^TM、Maxapem^TM、Properase^TM、Purafect^TM、Purafect OxP^TM、FN2^TM、FN3^TM和FN4^TM(Genencor International,Inc.)。而且，本领域描述了许多蛋白酶变体。WO 99/27082中给出了现有技术中蛋白酶变体的完整列表。

虽然已描述了大量有用的蛋白酶变体，但是对于许多工业应用，例如洗衣或硬表面清洁而言，仍需要新的改进的蛋白酶或蛋白酶变体。因此，本发明的一个目的是提供改进的枯草杆菌酶变体用于此类目的。

发明内容

因此，在第一方面，本发明涉及如下的枯草杆菌酶变体：

a)其至少包含在62位、68位、97位、98位、99位、106位、131位、170位、245位、252位的一处或多处对氨基酸残基K、H、R、E、D、Q、N、C、V、L、I、P、M、F、W、Y、G、A、S、T之一的插入、替代或缺失与至少一个下列修饰的组合：

＊0AQSVPWG；A1T，V；Q2L；S3T，A，L；V4L，A；I8V，T；S9G，D，R，K，L，V；R10H，K；V11A；Q12D；

A13V；P14S，T，D，A，M，V，K，Q，L，H，R，I；A15M，T；A16P；H17R；N18S，H；R19W，K，L，F，G，I；

G20＊，R，A；L21F，LP，LW，LA，LG；T22S，A，K，TV，TG，TL，TW，TV，G，L，TY；G23S；S24P；K27R，

V28I；V30I；I35T，V；T38S；P40L；N43D；R45H，K；G46D；A48T；S49N；F50S；V51A，I，D；P52V，A；

P55S，A；S57P；G61E，D，S，R，GP；N62D，ND，NE，DE，NG，E，S；V68A，S，L，I；T71A；I72V；L75I；

N76S，D；N77S；S78T；V81A；A85T；S87C；A88V，T；E89G；K94N；V95C，T；L96LA，LG；

G97E，D，W，A，GG，GA，GV，N，GS；A98S，D，E，T，AS，AD，AV，AE，AH，Q，N，M，L，G，R，V，S；

S99D，L，A，AD，SD，SM，SG，DA，P，G，N，C，M，V，I；G100S，GE，C；S101SA，SK；G102D，S；

S103D，E，Y，L，Q，H，T；V104T，S，R，I，N，M，L，D；S106D，E，T，M，G，A，L，F，I；I107T，V，M；A108V，T，S；

L111I，V；A114V；N116S，D；G118D；M119L，I，V，A，S；H120N，D，Q，K，E，Y，S；V121A；L124C；

L126I；G127E；S128N，I，G，C；P129PSN，T，E，D，S，N，A；S130P，T，C，＊；