[发明专利]用于确定花粉群的花粉活力和/或成熟度的方法

权利要求书

1.用于确定花粉群的花粉活力和/或成熟度的方法，包括：

从花中机械移取未成熟或成熟的花粉粒；

在缓冲液中重悬花粉粒，所述缓冲液具有使花粉在制备和测量期间保持存活，以及为通过使用阻抗式流式细胞术(IFC)的测量提供充分导电性的能力；

将细胞悬浮液通过具有适合于微流体设备的孔径的适当的过滤器，所述微流体设备适配于实施阻抗式流式细胞术(IFC)；

将过滤的悬浮液通过针对各个花粉类型校准的微流体设备，并以预定频率测量花粉粒的阻抗；

存储测量的各花粉粒的阻抗值以及测量频率，所述阻抗值具有幅值及其相关相位角；

计数过滤的悬浮液中的花粉粒；以及

根据振幅和/或相位值，通过手工或自动设定合适的门控以鉴别花粉粒，并确定分析的花粉群的活性比非活性的比率或成熟度，

还包括通过以下鉴定植物细胞是活性还是非活性的：

将存储的具有幅值和相位角值的阻抗值排列在x-y-矩阵中；

确定具有较低相位角和较高相位角的数据组之间的门控；

计数不同数据组的花粉粒阻抗值；

计算阻抗值的相位角低于门控的花粉量和阻抗值的相位角高于门控的花粉量之间的比率；

将所述比率与包含各花粉数据的数据库的各比率比较，用于确定花粉的活力是否足以用于给定的特定目的；以及

展示该分析群体的结果；或

还包括通过以下鉴定成熟度：

确定幅值和/或角度值，作为测量频率的函数；

将所述幅值和/或角度值与包含各花粉的数据的数据库的各值比较；

将所述植物细胞鉴定为属于特定的发育阶段；以及

展示该分析群体的结果。

2.根据权利要求1所述的方法，其中将该植物细胞在阻抗式流式细胞仪(IFC)中的特定微流体芯片内暴露于交流电(AC)场，所述交流电(AC)场的频率范围为0.1到600MHz。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述交流电(AC)场的频率范围为0.1到200MHz。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述交流电(AC)场的频率范围为0.25到30MHz。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中分析的植物细胞根据其不同的阻抗信号而分开，并用于下游过程。

6.根据权利要求5所述的方法，其中分析的植物细胞用于育种目的。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述结果用于种子产生过程和在种子产生过程期间使用，来控制植物细胞产生过程，或来检测这些过程中的细菌、真菌或其他污染。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述结果用于选择用于雄性可育性/不育性、耐热性、耐盐性和/或胁迫耐性的植物育种材料。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述结果用于优化获得具有最大活力的花粉所需的植物生长条件。

10.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，还包括确定用于鉴定花粉的特征的触发参数。

11.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中确定分析的花粉群的活力或成熟度是实时实施的。

12.微流体设备在选择用于雄性可育性/不育性、耐热性、耐盐性和/或胁迫耐性的植物育种材料期间，在种子产生过程期间分别通过鉴定植物细胞是活性还是非活性的和/或将植物细胞鉴定为属于特定的发育阶段而控制植物细胞产生过程，或检测植物产生过程中的细菌、真菌或其他污染的用途，所述微流体设备包括至少一个特定微流体芯片并且适配于用交流电(AC)场实施阻抗式流式细胞术(IFC)，所述交流电(AC)场的频率范围为0.1到600MHz。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述交流电(AC)场的频率范围为0.1到200MHz。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述交流电(AC)场的频率范围为0.25到30MHz。